应用mRNA差异显示技术筛选猪前脂肪细胞分化相关的基因
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| ·研究目的与意义 | 第13页 |
| ·动物前脂肪细胞研究进展 | 第13-20页 |
| ·前脂肪细胞的增殖与分化 | 第14-15页 |
| ·脂肪细胞分化调节因子 | 第15-17页 |
| ·前脂肪细胞分化过程的转录调控因子 | 第17-19页 |
| ·前脂肪细胞的应用前景 | 第19-20页 |
| ·差异表达基因 | 第20-22页 |
| ·差异表达基因筛选方法 | 第20页 |
| ·DDRT-PCR 技术 | 第20-21页 |
| ·差异表达基因与脂肪的相关研究 | 第21-22页 |
| 2 猪前脂肪细胞的分离培养与鉴定 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第22页 |
| ·主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-25页 |
| ·猪前脂肪细胞的分离培养 | 第24页 |
| ·MTT 法绘制猪前脂肪细胞的生长曲线 | 第24页 |
| ·猪前脂肪细胞的形态学观察 | 第24页 |
| ·脂蛋白脂酶（LPL）活性测定 | 第24-25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·猪前脂肪细胞的生长曲线绘制 | 第25页 |
| ·猪前脂肪细胞形态学观察 | 第25-27页 |
| ·成熟脂肪细胞的油红O 染色鉴定 | 第27页 |
| ·脂蛋白脂酶活性测定 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| ·关于猪前脂肪细胞培养 | 第28-29页 |
| ·关于脂肪细胞的鉴定 | 第29-30页 |
| ·猪前脂肪细胞增殖与分化的规律 | 第30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 3 猪前脂肪细胞分化相关基因的筛选 | 第31-58页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·菌种与载体 | 第31-32页 |
| ·酶类及其他试剂 | 第32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| ·引物合成 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·细胞总RNA 提取与检测 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR | 第34-35页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染 | 第35-36页 |
| ·差异片段的PAGE 回收与PCR 再扩增 | 第36-37页 |
| ·差异片段的琼脂糖纯化与回收 | 第37页 |
| ·差异片段的克隆筛选 | 第37-38页 |
| ·差异片段的测序及其同源性分析 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-51页 |
| ·mRNA 质量检测 | 第39页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳银染结果 | 第39-43页 |
| ·差异片段的纯化回收 | 第43-44页 |
| ·重组菌的PCR 鉴定 | 第44页 |
| ·差异片段的测序结果及其同源性分析 | 第44-51页 |
| ·讨论 | 第51-56页 |
| ·细胞总RNA 提取 | 第51页 |
| ·DDRT-PCR | 第51-52页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与差异条带回收 | 第52-53页 |
| ·差异片段的再扩增与琼脂糖回收 | 第53-54页 |
| ·关于DDRT-PCR 的假阳性 | 第54页 |
| ·差异基因EST 序列同源性分析 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 导师简介 | 第69-70页 |
