| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1.前言 | 第12-32页 |
| ·唾液酸及其研究意义 | 第12-14页 |
| ·唾液酸的生理功能 | 第12-14页 |
| ·唾液酸的抗肿瘤作用 | 第12-13页 |
| ·唾液酸抗老年性痴呆的作用 | 第13页 |
| ·唾液酸的抗病毒作用 | 第13-14页 |
| ·糖基转移酶 | 第14-18页 |
| ·糖基转移酶的分类 | 第14-16页 |
| ·多糖和糖基转移酶的功能 | 第16-18页 |
| ·植物中的分布及作用 | 第16页 |
| ·细菌中的分布及作用 | 第16-17页 |
| ·哺乳动物中的分布及作用 | 第17-18页 |
| ·唾液酸转移酶及其分类 | 第18-22页 |
| ·唾液酸转移酶 | 第18页 |
| ·唾液酸转移酶的分类 | 第18-21页 |
| ·PmsT | 第20-21页 |
| ·Pm0106 | 第21页 |
| ·唾液酸转移酶的催化反应机理 | 第21-22页 |
| ·模体及其分类 | 第22-23页 |
| ·模体 | 第22页 |
| ·常见模体的分类： | 第22-23页 |
| ·广义碱 | 第23-24页 |
| ·酸碱的定义 | 第23-24页 |
| ·氢键链 | 第24-26页 |
| ·氢键 | 第24页 |
| ·氢键的形成条件 | 第24页 |
| ·氢键的饱和性和方向性 | 第24-25页 |
| ·氢键的存在对物质的某些性质的影响 | 第25-26页 |
| ·氢键链及其作用 | 第26页 |
| ·高效液相色谱法及其的检测原理 | 第26页 |
| ·飞行时间质谱( MALDI-TOF)的原理及操作流程 | 第26-28页 |
| ·MALDI-TOF-MS的基本原理 | 第26-27页 |
| ·MALDI-TOF-MS的关键因素及解离模式 | 第27页 |
| ·MALDI-TOF-MS中样品的测量方法及点靶方法 | 第27页 |
| ·MALDI-TOF-MS的操作过程及其注意事项 | 第27-28页 |
| ·国内外研究现状 | 第28-30页 |
| ·研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-52页 |
| ·材料 | 第32-38页 |
| ·Pm0106基因 | 第32页 |
| ·载体来源 | 第32页 |
| ·感受态细胞 | 第32页 |
| ·主要实验试剂及耗材 | 第32-34页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33-34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-38页 |
| ·培养基的配制 | 第34-35页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳相关溶液的配制 | 第35页 |
| ·蛋白电泳相关溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·蛋白的表达纯化相关溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·酶促反应缓冲液及溶液的配制 | 第37页 |
| ·薄层色谱展开剂的配制 | 第37-38页 |
| ·薄层色谱显色剂的配制 | 第38页 |
| ·高效液相色谱流动相的配制 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-52页 |
| ·重组质粒的构建 | 第38-41页 |
| ·野生型 Pm0106 表达系统的构建 | 第38页 |
| ·引物的序列及合成 | 第38页 |
| ·载体的选择 | 第38-39页 |
| ·PCR 体系（50μL）如下 | 第39-40页 |
| ·PCR 的程序 | 第40页 |
| ·0.8%琼脂糖凝胶电泳回收 PCR 产物 | 第40页 |
| ·酶切 | 第40-41页 |
| ·回收产物连接 | 第41页 |
| ·连接反应产物转化 | 第41页 |
| ·重组质粒的测序检测 | 第41页 |
| ·取测序正确的质粒转化： | 第41-43页 |
| ·Pm0106突变株Y141D、M144D141D、D141N、D141N-N109D、D141N-N109D-D33N、N109A141D、D33A141D、D33L141D蛋白的表达与纯化 | 第43-48页 |
| ·建立酶反应体系 | 第48-52页 |
| 3 结果分析 | 第52-62页 |
| ·以pET15b为载体的目的基因的克隆及其突变的构建结果 | 第52-53页 |
| ·目的基因的PCR扩增结果 | 第52页 |
| ·Pm0106突变株的突变结果 | 第52-53页 |
| ·蛋白的表达与纯化及浓度测定结果 | 第53-55页 |
| ·Pm0106各个突变株的蛋白表达 | 第53页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第53-55页 |
| ·酶活性反应结果 | 第55-62页 |
| ·高效液相色谱检测各个突变株反应结果 | 第55-58页 |
| ·飞行时间质谱检测突变株Y141D酶活反应产物及原料结果 | 第58页 |
| ·HPLC检测不同PH对酶活反应影响的结果 | 第58-60页 |
| ·HPLC检测 45℃处理不同时间后Y141D（A），N109A141D(B)，D33L141D的反应结果 | 第60页 |
| ·薄层层析技术检测个突变株酶活性的结果 | 第60-62页 |
| 4.讨论 | 第62-65页 |
| ·高效液相色谱法检测唾液酸转移酶Pm0106各个突变株参与反应活性的必要性 | 第62页 |
| ·唾液酸转移酶Pm0106各个突变株参与反应的必须条件及合适的酶浓度 | 第62-63页 |
| ·Y141D突变株酶活反应在不同PH下的影响 | 第63-64页 |
| ·底物和温度对突变株反应的影响 | 第64-65页 |
| 5.结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
