| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-26页 |
| 1 细菌耐药性研究 | 第14-16页 |
| 2 嗜水气单胞菌相关研究 | 第16-19页 |
| ·嗜水气单胞菌的危害性 | 第16-17页 |
| ·嗜水气单胞菌的耐药机制 | 第17-19页 |
| 3 细菌生物被膜的研究 | 第19-23页 |
| ·细菌生物被膜的形成过程 | 第19-21页 |
| ·生物被膜的耐药机制 | 第21-22页 |
| ·嗜水气单胞菌中生物被膜相关研究 | 第22-23页 |
| 4 细菌耐药性的研究方法 | 第23-25页 |
| ·基因组学 | 第23页 |
| ·转录组学 | 第23-24页 |
| ·代谢组学 | 第24页 |
| ·蛋白质组学 | 第24-25页 |
| 5 本论文主要研究内容及其研究意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-43页 |
| 1 材料 | 第26-30页 |
| ·常用试剂来源 | 第26页 |
| ·主要设备 | 第26-28页 |
| ·生物材料 | 第28页 |
| ·常用试验试剂配制 | 第28-30页 |
| ·培养基和抗生素配制 | 第28页 |
| ·蛋白提取试剂配制 | 第28页 |
| ·电泳试剂配制 | 第28-29页 |
| ·酶解、标记和除盐试剂配制 | 第29页 |
| ·蛋白纯化试剂配制 | 第29-30页 |
| ·ELISA/Western blotting试剂配制 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-43页 |
| ·菌体的培养与收集 | 第30-31页 |
| ·细菌全蛋白的提取 | 第31页 |
| ·生物被膜状态细菌全蛋白的提取 | 第31页 |
| ·浮游态细菌全蛋白的提取 | 第31页 |
| ·嗜水气单胞菌耐药菌株的筛选 | 第31-32页 |
| ·药物敏感实验 | 第32-33页 |
| ·细菌MIC的测定 | 第32页 |
| ·细菌生存率的测定 | 第32-33页 |
| ·生物被膜状态嗜水气单胞菌在CTC和TCS联合作用下生存率的测定 | 第33页 |
| ·高表达菌株rpll和glms存活率的测定 | 第33页 |
| ·样品的酶解和标记 | 第33-35页 |
| ·生物被膜细菌全蛋白样品的酶解和标记 | 第33-35页 |
| ·浮游态细菌全蛋白样品的酶解和标记 | 第35页 |
| ·质谱分析 | 第35-36页 |
| ·数据处理 | 第36-37页 |
| ·荧光定量PCR | 第37-40页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·cDNA的合成 | 第39页 |
| ·荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·目的基因的克隆与表达 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·基因克隆与表达 | 第40-41页 |
| ·蛋白纯化 | 第41页 |
| ·免疫血清的制备 | 第41-42页 |
| ·ELISA测定效价 | 第42页 |
| ·Western blotting分析 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-75页 |
| 第一节 生物被膜状态嗜水气单胞菌四环素耐药相关蛋白的研究 | 第43-60页 |
| ·传代耐药菌株的筛选 | 第43页 |
| ·生物被膜状态下耐药菌株的生存率 | 第43-44页 |
| ·利用TMT标记结合LC-MS/MS对样品进行蛋白鉴定 | 第44-45页 |
| ·生物被膜状态嗜水气单胞菌应激性和获得性耐药性的定量蛋白质组学比较分析 | 第45-48页 |
| ·差异蛋白的功能分类及注释分析 | 第48-50页 |
| ·差异蛋白的STRING和KEGG途径分析 | 第50-52页 |
| ·蛋白质组学结果验证 | 第52-53页 |
| ·生物被膜状态下CTC和TCS协同作用抑制细菌的生长 | 第53-58页 |
| ·细菌存活率的测定 | 第54-55页 |
| ·mRNA水平上验证脂肪酸生物合成相关基因 | 第55-56页 |
| ·Western blotting分析 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第二节 浮游态嗜水气单胞菌四环素耐药相关蛋白的研究 | 第60-75页 |
| ·浮游态耐药菌株的生存率 | 第60-61页 |
| ·利用iTRAQ标记结合LC-MS/MS对样品进行蛋白鉴定 | 第61-62页 |
| ·浮游态嗜水气单胞菌应激性和获得性耐药的定量蛋白质组学比较 | 第62-64页 |
| ·差异蛋白的功能分类及注释分析 | 第64-66页 |
| ·蛋白的KEGG途径分析和相互作用网络分析 | 第66-68页 |
| ·蛋白质组学结果验证 | 第68-73页 |
| ·q-PCR验证相关基因 | 第68-69页 |
| ·Western blotting分析 | 第69-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| 第四章 总结与展望 | 第75-77页 |
| 1 总结 | 第75页 |
| 2 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 硕士研究生期间发表的研究论文 | 第84页 |
| 会议摘要 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
