摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-25页 |
·解旋酶综述 | 第12-17页 |
·解旋酶概念及分类 | 第12-14页 |
·解旋酶功能性质及工作机制 | 第14-17页 |
·RECQ概述 | 第17-20页 |
·RECQ基本性质 | 第17-18页 |
·RECQ结构特征 | 第18-20页 |
·RECQL研究进展 | 第20页 |
·解旋酶研究方法 | 第20-23页 |
·凝胶滞缓实验(EMSA) | 第21页 |
·停留光谱技术(Stopped-flow) | 第21-22页 |
·荧光各向异性技术(Fluorescence Anisotropy) | 第22-23页 |
·单分子技术 | 第23页 |
·本课题研究的目的和意义 | 第23-25页 |
第二章 BtRECQL解旋酶表达载体构建及表达纯化 | 第25-42页 |
·材料 | 第25-29页 |
·载体、菌株及分子试剂 | 第25页 |
·基因合成所用引物及序列 | 第25-26页 |
·配制主要试剂 | 第26-29页 |
·使用的主要仪器设备 | 第29页 |
·实验方法 | 第29-37页 |
·PCR扩增Bt Recql~T与Bt Recql~(TM)编码序列 | 第29-32页 |
·表达载体构建 | 第32-36页 |
·重组蛋白的表达与纯化 | 第36-37页 |
·结果 | 第37-40页 |
·PCR扩增Bt Recql~T与Bt Recql~(TM)编码序列 | 第37-38页 |
·表达载体构建 | 第38-40页 |
·重组蛋白的表达与纯化 | 第40页 |
·讨论 | 第40-42页 |
第三章 BtRECQL~(TM)理化性质分析 | 第42-48页 |
·材料 | 第42-43页 |
·DNA底物及蛋白样品 | 第42页 |
·配制主要试剂 | 第42-43页 |
·使用的主要仪器设备 | 第43页 |
·实验方法 | 第43-44页 |
·动态光散射分析BtRECQLTM | 第43-44页 |
·BtRECQLTM DNA结合活性测定 | 第44页 |
·结论 | 第44-46页 |
·动态光散射观测BtRECQLTM的聚集状态 | 第44-45页 |
·BtRECQL~(TM) DNA结合活性分析 | 第45-46页 |
·讨论 | 第46-48页 |
第四章 BtRECQL解旋条件优化及解旋活性比较 | 第48-60页 |
·材料 | 第48-49页 |
·DNA底物及蛋白样品 | 第48页 |
·配制主要试剂 | 第48-49页 |
·使用的主要仪器设备 | 第49页 |
·实验方法 | 第49-51页 |
·BtRECQL蛋白浓度对解旋活性的影响 | 第49-50页 |
·反应Buffer成分对BtRECQL解旋活性的影响 | 第50页 |
·ATP浓度对解旋活性的影响 | 第50-51页 |
·孵育温度对解旋活性的影响 | 第51页 |
·BtRECQL解旋活性比较 | 第51页 |
·结论 | 第51-58页 |
·BtRECQL蛋白浓度对解旋活性的影响 | 第51-52页 |
·反应Buffer成分对BtRECQL解旋活性的影响 | 第52-55页 |
·ATP浓度对BtRECQL解旋活性的影响 | 第55-56页 |
·孵育温度对BtRECQL解旋活性的影响 | 第56页 |
·BtRECQL全长及突变体蛋白解旋活性比较 | 第56-58页 |
·讨论 | 第58-60页 |
第五章 结论 | 第60-62页 |
参考文献 | 第62-69页 |
附录 | 第69-70页 |
缩略词 | 第70-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
作者简介 | 第72页 |