| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| ·嗜碱芽孢杆菌 | 第8页 |
| ·嗜碱微生物的分类 | 第8页 |
| ·嗜碱微生物的应用 | 第8页 |
| ·丙氨酸脱氢酶 | 第8-11页 |
| ·脱氢酶 | 第8-9页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的研究进展 | 第9页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的分布 | 第9页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的功能 | 第9-10页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的活性 | 第10页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的作用机制 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第11-13页 |
| ·大肠杆菌表达系统的利弊 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统的表达载体 | 第12页 |
| ·外源基因的表达 | 第12-13页 |
| ·蛋白质的分离纯化 | 第13-14页 |
| ·蛋白质样品的预处理 | 第13页 |
| ·蛋白质的分离纯化方法 | 第13-14页 |
| ·蛋白质结晶 | 第14-17页 |
| ·蛋白质结晶的过程 | 第14页 |
| ·蛋白质结晶常用的方法 | 第14-15页 |
| ·筛选结晶条件的方法 | 第15页 |
| ·蛋白质结晶的主要影响因素 | 第15-16页 |
| ·衍射数据的收集和处理 | 第16-17页 |
| ·相位的确定 | 第17页 |
| ·模型的建立和修正 | 第17页 |
| ·研究目的和研究内容 | 第17-19页 |
| ·研究目的 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-40页 |
| ·实验材料 | 第19-25页 |
| ·目的基因和表达载体及菌株 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-21页 |
| ·实验仪器 | 第21页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第21-25页 |
| ·实验方法 | 第25-40页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)重组质粒的构建 | 第25-29页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)蛋白的表达与纯化 | 第29-33页 |
| ·ALD蛋白结晶条件的筛选和优化 | 第33-38页 |
| ·ALD蛋白晶体衍射数据的收集及分析 | 第38页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald R15A重组质粒的构建 | 第38-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-64页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)重组质粒的构建结果 | 第40-42页 |
| ·Ald目的基因的PCR扩增和表达载体pET-22b(+)的提取 | 第40页 |
| ·重组质粒的PCR及双酶切鉴定结果 | 第40-42页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)重组蛋白的表达和纯化结果 | 第42-46页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)重组蛋白的试表达结果 | 第42页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)重组蛋白的Ni-NTA亲和层析结果 | 第42-43页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)重组蛋白的阴离子交换层析结果 | 第43-45页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)重组蛋白的凝胶过滤层析结果 | 第45页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)重组蛋白的活性检测结果 | 第45-46页 |
| ·ALD蛋白结晶条件的筛选及进一步的优化结果 | 第46-53页 |
| ·ALD蛋白结晶条件的筛选结果 | 第46-48页 |
| ·ALD蛋白结晶条件的初步优化结果 | 第48-51页 |
| ·ALD蛋白晶体的添加剂筛选结果 | 第51-52页 |
| ·ALD蛋白晶体的脱水实验结果 | 第52-53页 |
| ·ALD蛋白晶体衍射数据的收集及相关分析 | 第53-54页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)的复合物共结晶结果 | 第54-58页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)二元复合物的共结晶结果 | 第54-57页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)三元复合物的共结晶结果 | 第57-58页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(ALD)单晶和复合物共结晶的初步分析 | 第58-59页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体ALD R15A的结晶结果 | 第59-64页 |
| ·丙氨酸脱氢酶突变体Ald R15A重组质粒的构建结果 | 第59-60页 |
| ·丙氨酸脱氢酶ALD R15A的表达及纯化结果 | 第60-62页 |
| ·丙氨酸脱氢酶ALD R15A结晶条件的筛选及优化 | 第62-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-73页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第73-74页 |
| 8 致谢 | 第74页 |
