| 本论文创新点 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 1 绪论 | 第15-28页 |
| ·铜污染及其来源 | 第15页 |
| ·铜污染对高等植物的危害 | 第15-16页 |
| ·金属型植物 | 第16-20页 |
| ·金属型植物定义 | 第16-17页 |
| ·金属型植物的抗性机制 | 第17-20页 |
| ·植物的资源分配 | 第20页 |
| ·蔗糖代谢相关酶 | 第20-23页 |
| ·蔗糖磷酸合酶性质及其在蔗糖代谢中的作用 | 第20-21页 |
| ·蔗糖合酶性质及其在蔗糖代谢中的作用 | 第21页 |
| ·转化酶性质及其在蔗糖代谢中作用 | 第21-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第23-26页 |
| ·表达载体 | 第23-24页 |
| ·表达宿主菌 | 第24页 |
| ·外源基因转化至酵母菌株 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母转录后调控 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 2 铜胁迫下矿区及非矿区鸡眼草植物营养生长差异 | 第28-39页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·材料与方法 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·植物培养及铜处理 | 第29-30页 |
| ·水培植物根系形态及叶片面积的测定 | 第30页 |
| ·水培植物生物量的测定 | 第30页 |
| ·叶片光合作用测定 | 第30页 |
| ·统计处理 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-36页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草地上部分生物量、根生物量与根冠比的影响 | 第30-32页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草根生长及根结构的影响 | 第32-33页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草光合作用的影响 | 第33-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 3 铜胁迫下矿区及非矿区种群鸡眼草蔗糖分解酶活性差异 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·植物培养与铜处理 | 第40页 |
| ·蔗糖合酶分解方向活性的测定 | 第40-41页 |
| ·蔗糖转化酶活性的测定 | 第41页 |
| ·蔗糖及还原糖的测定 | 第41-42页 |
| ·植物铜含量的测定 | 第42页 |
| ·统计处理 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-50页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草根与叶片中蔗糖及还原糖的含量的影响 | 第43-44页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草根与叶片中蔗糖合酶分解方向活性的影响 | 第44页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草根与叶片中液泡转化酶、细胞壁转化酶和细胞质转化酶活性的影响 | 第44-46页 |
| ·铜胁迫对两个种群鸡眼草根与叶片中铜含量的影响 | 第46-47页 |
| ·相关性分析 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 4 矿区及非矿区鸡眼草根部酸性转化酶全长基因CDNA的克隆 | 第53-77页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-62页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·植物培养及铜处理 | 第54页 |
| ·总RNA的提取 | 第54页 |
| ·总RNA的电泳检测 | 第54页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第54-55页 |
| ·酸性转化酶基因中间片段的克隆 | 第55-56页 |
| ·3’RACE实验 | 第56-57页 |
| ·5’RACE实验 | 第57-59页 |
| ·鸡眼草酸性转化酶基因全长序列的扩增 | 第59-60页 |
| ·鸡眼草两个种群酸性转化酶基因的生物信息学研究 | 第60-62页 |
| ·结果 | 第62-74页 |
| ·鸡眼草根部总RNA的提取 | 第62页 |
| ·鸡眼草两个种群酸性转化酶基因中间片段的结果 | 第62-63页 |
| ·鸡眼草两个种群酸性转化酶3’RACE结果 | 第63页 |
| ·鸡眼草两个种群酸性转化酶5’RACE结果 | 第63-64页 |
| ·鸡眼草两个种群根系酸性转化酶全长序列结果 | 第64-70页 |
| ·进化树的构建 | 第70-72页 |
| ·两个种群鸡眼草酸性转化酶三级结构 | 第72-73页 |
| ·两个种群鸡眼草酸性转化酶与底物蔗糖分子对接计算机模拟 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 5 铜胁迫下矿区与非矿区种群鸡眼草酸性转化酶基因转录水平比较 | 第77-86页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·材料与方法 | 第77-80页 |
| ·植物培养及铜处理 | 第77页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第77-78页 |
| ·Real-time荧光定量PCR引物的设计 | 第78页 |
| ·荧光定量PCR | 第78-79页 |
| ·统计分析 | 第79-80页 |
| ·结果 | 第80-83页 |
| ·RNA质量检测 | 第80页 |
| ·实时荧光定量PCR反应的可靠性分析 | 第80-82页 |
| ·铜胁迫下两个种群鸡眼草根部酸性转化酶基因的转录水平 | 第82-83页 |
| ·鸡眼草根中酸性转化酶转录水平与根中酸性转化酶活性,根中含糖量及根生物量根苗的比相关性分析 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 6 两个种群鸡眼草酸性转化酶基因在毕赤酵母X33的表达 | 第86-98页 |
| ·前言 | 第86-87页 |
| ·材料与方法 | 第87-91页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·表达载体的构建 | 第87-89页 |
| ·pPICZmNCWinv,pPICZ(?)Winv,pPICZ(?)NCVinv和pPICZ(?)CVinv质粒的线性化 | 第89页 |
| ·线性化重组质粒转化至Pichia pastoris X33 | 第89-90页 |
| ·酸性转化酶基因在毕赤酵母中的诱导表达及纯化 | 第90-91页 |
| ·表达产物的活性分析 | 第91页 |
| ·结果 | 第91-96页 |
| ·表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·重组质粒的酵母转化和鉴定 | 第92-93页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第93-94页 |
| ·重组酸性转化酶酶学性质测定 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| 7 主要研究结论及展望 | 第98-101页 |
| ·主要研究结论 | 第98-99页 |
| ·两个种群鸡眼草营养生长差异 | 第98页 |
| ·两个种群鸡眼草根部蔗糖代谢机制 | 第98页 |
| ·两个种群鸡眼草根部酸性转化酶基因的克隆 | 第98-99页 |
| ·铜胁迫下两个种群鸡眼草根部酸性转化酶的转录表达水平 | 第99页 |
| ·两个种群鸡眼草根部酸性转化酶的毕赤酵母表达 | 第99页 |
| ·展望 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-122页 |
| 攻博期间发表的科研成果目录 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
