| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| ·研究背景 | 第12-16页 |
| ·过氧化氢酶概述 | 第12-13页 |
| ·过氧化氢酶的作用机制 | 第13页 |
| ·过氧化氢酶的应用 | 第13-14页 |
| ·过氧化氢酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·大肠杆菌表达系统的简介 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌表达系统的主要优点 | 第16页 |
| ·大肠杆菌中的质粒载体 | 第16-17页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第17页 |
| ·大肠杆菌系统存在的一些问题 | 第17页 |
| ·枯草杆菌表达系统的简介 | 第17-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的主要优点 | 第17-18页 |
| ·枯草杆菌中的质粒载体 | 第18页 |
| ·外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第18页 |
| ·枯草杆菌系统存在的一些问题 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统的简介 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统的主要优点 | 第19页 |
| ·毕赤酵母中的质粒载体 | 第19-20页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的表达 | 第20页 |
| ·毕赤酵母系统存在的一些问题 | 第20页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 锰过氧化氢酶基因的克隆和在大肠杆菌中的表达 | 第22-34页 |
| ·材料与方法 | 第22-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·仪器和试剂 | 第23-25页 |
| ·密码子优化 | 第25页 |
| ·重组质粒pET28a/MnCAT的构建 | 第25页 |
| ·大肠杆菌化转感受态细胞的制备和化转 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第26页 |
| ·MnCAT在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第26-27页 |
| ·锰过氧化氢酶酶活的测定 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第27页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·MnCAT的密码子优化 | 第27-29页 |
| ·重组表达质粒pET28a-MnCAT的构建及验证 | 第29-31页 |
| ·MnCAT在大肠杆菌中的表达 | 第31-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 锰过氧化氢酶在大肠杆菌中表达条件的优化和酶学性质的研究 | 第34-48页 |
| ·材料和方法 | 第34-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·仪器和试剂 | 第34-36页 |
| ·表达条件优化 | 第36页 |
| ·MnCAT蛋白纯化 | 第36页 |
| ·酶学性质检测 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-44页 |
| ·IPTG浓度对重组菌发酵生产MnCAT的影响 | 第37-38页 |
| ·Mn离子浓度对重组菌发酵生产MnCAT的影响 | 第38页 |
| ·温度对重组菌发酵生产MnCAT的影响 | 第38-39页 |
| ·锰过氧化氢酶的纯化 | 第39-40页 |
| ·MnCAT的酶学性质的研究 | 第40-43页 |
| ·MnCAT的热处理 | 第43-44页 |
| ·锰过氧化氢酶基因在大肠杆菌胞外表达载体pET20b中的克隆与表达 | 第44-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第4章 锰过氧化氢酶基因在枯草杆菌中的克隆与表达 | 第48-56页 |
| ·材料与方法 | 第48-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·仪器和试剂 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·培养方法 | 第50页 |
| ·PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·酶切、连接、转化和重组子的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组B.subtilis的构建与筛选 | 第52页 |
| ·枯草杆菌转化子的筛选 | 第52-53页 |
| ·重组枯草的鉴定和诱导表达 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-55页 |
| ·重组质粒pMA5-MnCAT的构建及双酶切验证 | 第53-54页 |
| ·重组质粒pMA5-MnCAT的双酶切验证 | 第54页 |
| ·重组B.subtilisWB600/pMA5-MnCAT的表达 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第5章 锰过氧化氢酶基因在毕赤酵母中的克隆与表达 | 第56-68页 |
| ·材料与方法 | 第56-61页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·仪器和试剂 | 第56-57页 |
| ·培养基 | 第57-58页 |
| ·培养方法 | 第58页 |
| ·PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·酶切、连接、转化和重组子的鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组P.pastoris的构建与筛选 | 第60-61页 |
| ·毕赤酵母转化子的筛选 | 第61页 |
| ·重组酵母的鉴定和诱导表达 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-67页 |
| ·重组质粒pPIC9K-MnCAT的构建及双酶切验证 | 第61-62页 |
| ·重组质粒pPIC9K-MnCAT的双酶切验证 | 第62-63页 |
| ·P..pastoris KM71的电转化 | 第63页 |
| ·重组P.pastoris KM71/pPIC9K-MnCAT的筛选 | 第63-64页 |
| ·重组P.pastoris KM71/pPIC9K-MnCAT的表达 | 第64页 |
| ·重组P.pastoris KM71/pPIC9K-MnCAT摇瓶水平上的诱导表达 | 第64-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第6章 结论与展望 | 第68-70页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
