| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-5页 |
| 符号表 | 第5-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第8-18页 |
| ·转基因克隆动物的研究进展 | 第8-11页 |
| ·转基因克隆动物的应用 | 第11-13页 |
| ·人类疾病动物模型 | 第11-12页 |
| ·异体器官移植的研究 | 第12页 |
| ·作为“乳腺生物发生器” | 第12-13页 |
| ·其它 | 第13页 |
| ·转基因克隆技术所存在的障碍 | 第13-14页 |
| ·DNA 测序技术及 illumina/Solexa | 第14-16页 |
| ·慢病毒表达载体及其应用优势 | 第16页 |
| ·本研究的内容、目的及意义 | 第16-18页 |
| 第2章 转基因克隆牛胎盘差异表达 miRNAs 及受影响的通路 | 第18-39页 |
| ·材料和方法 | 第20-27页 |
| ·胎盘组织的采集与保存 | 第20页 |
| ·主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| ·主要试剂及准备工作 | 第21-23页 |
| ·胎盘组织总 RNA 的提取 | 第23页 |
| ·small RNA-Seq 文库的准备 | 第23-24页 |
| ·实验所用数据库 | 第24-25页 |
| ·miRNAs 的生物信息学分析及通路分析 | 第25-26页 |
| ·数据分析 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-37页 |
| ·四组胎盘组织中小分子 RNA 的组成 | 第27页 |
| ·miRNAs 的差异表达谱及预测的新 miRNAs | 第27-34页 |
| ·预测靶基因所参与的主要信号通路 | 第34-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第3章 bta-miR-708 慢病毒表达载体的构建及鉴定 | 第39-55页 |
| ·材料和方法 | 第39-49页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·主要仪器和设备 | 第40页 |
| ·相关试剂及其配制 | 第40-44页 |
| ·引物的设计 | 第44页 |
| ·感受态 DH5α的制备 | 第44页 |
| ·慢病毒三个包装质粒的转化 | 第44-45页 |
| ·pri-miR-708 表达载体的构建与鉴定 | 第45-47页 |
| ·慢病毒包装质粒大提 | 第47页 |
| ·pri-miR-708 慢病毒表达载体的包装与滴度测定 | 第47-48页 |
| ·慢病毒表达载体感染牛胎盘滋养层细胞及 qPCR 鉴定 miR-708 的表达 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-53页 |
| ·PCR 扩增 pri-miR-708 结果 | 第49-50页 |
| ·pCDH-CMV-pri-miR-708-EF1-copGFP 酶切，测序鉴定 | 第50-51页 |
| ·慢病毒包装质粒大提 | 第51页 |
| ·慢病毒颗粒的制备及其滴度测定 | 第51-52页 |
| ·重组 miR-708 慢病毒载体在牛胎盘滋养层细胞中的表达 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第4章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-70页 |
| 缩略语词汇表 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第73-74页 |
