| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·鞣化激素及其基因的分子结构特性 | 第13-16页 |
| ·鞣化激素是一种异源二聚体蛋白质 | 第13页 |
| ·BURS和PBURS亚基的结构及其进化上的保守性 | 第13-15页 |
| ·BURS和PBURS基的基因结构 | 第15-16页 |
| ·鞣化激素在昆虫体内的合成和释放 | 第16-20页 |
| ·合成 | 第16-20页 |
| ·释放 | 第20页 |
| ·鞣化激素的作用机制 | 第20-21页 |
| ·受体 | 第20-21页 |
| ·信号转导路径 | 第21页 |
| ·鞣化激素的功能 | 第21-25页 |
| ·在昆虫表皮黑化和硬化过程中的作用 | 第21-23页 |
| ·调控新羽化成虫翅的伸展和成熟 | 第23页 |
| ·对昆虫免疫系统的影响 | 第23-25页 |
| 2 引言 | 第25-26页 |
| 3 材料与方法 | 第26-54页 |
| ·供试材料 | 第26-29页 |
| ·供试昆虫 | 第26页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·实验中所用的主要溶液 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂 | 第27-28页 |
| ·Western blot主要试剂 | 第28-29页 |
| ·试验方法 | 第29-54页 |
| ·鞣化激素α、β亚基基因的克隆 | 第29-34页 |
| ·棉铃虫中枢神经系统的解剖 | 第29页 |
| ·总RNA提取 | 第29-30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·5'-RACE-Ready cDNA的合成 | 第30页 |
| ·5'-RACE cDNA的巢式PCR、克隆及测序 | 第30-33页 |
| ·3'-RACE-Ready eDNA的合成 | 第33页 |
| ·3'-RACE cDNA的巢式PCR、克隆及测序 | 第33-34页 |
| ·棉铃虫鞣化激素氨基酸序列比对及进化树构建 | 第34页 |
| ·棉铃虫鞣化激素及其受体基因的时空表达模式 | 第34-37页 |
| ·总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·反转录 | 第36页 |
| ·引物的设计与合成 | 第36-37页 |
| ·Real Time PCR检测 | 第37页 |
| ·鞣化激素在棉铃虫中枢神经系统各神经中的表达 | 第37-38页 |
| ·棉铃虫中枢神经系统各神经节的解剖 | 第38页 |
| ·总RNA的提取 | 第38页 |
| ·Real Time PCR检测 | 第38页 |
| ·棉铃虫胚胎发育过程中相关基因的差异表达分析及酪氨酸羟化酶基因的发育表达模式 | 第38-41页 |
| ·卵不同发育时期转录组测序 | 第38-40页 |
| ·酪氨酸羟化酶基因序列的拼接及发育表达模式 | 第40-41页 |
| ·酪氨酸羟化酶基因cDNA全序列的拼接 | 第40页 |
| ·总RNA的提取 | 第40页 |
| ·反转录 | 第40页 |
| ·引物的设计与合成 | 第40页 |
| ·Real Time PCR检测 | 第40-41页 |
| ·棉铃虫蜕皮激素受体缺失对酪氨酸羟化酶表达的影响 | 第41-42页 |
| ·dsRNA的合成 | 第41-42页 |
| ·dsRNA的注射以及蜕皮激素的刺激 | 第42页 |
| ·Real Time PCR检测 | 第42页 |
| ·棉铃虫鞣化激素基因在293T细胞中的表达 | 第42-48页 |
| ·293T细胞的培养 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的构建(采用PCDNA3.1(-)为载体) | 第43-47页 |
| ·重组质粒的转染(磷酸钙转染法) | 第47页 |
| ·蛋白的回收 | 第47-48页 |
| ·鞣化激素α亚基同聚体、β亚基同聚体、α亚基β亚基异聚体蛋白及cAMP的刺激对棉铃虫幼虫脂肪体中酪氨酸羟化酶活性的影响 | 第48-50页 |
| ·棉铃虫幼虫脂肪体的体外培养 | 第48页 |
| ·样品的处理 | 第48页 |
| ·样品的准备及活性测定 | 第48-50页 |
| ·鞣化激素α亚基同聚体、β亚基同聚体、α亚基β亚基异聚体蛋白对棉铃虫脂肪体中免疫相关基因表达的影响 | 第50-52页 |
| ·棉铃虫鞣化激素幼虫脂肪体的体外培养及处理 | 第50页 |
| ·Real Time PCR检测处理后脂肪体组织免疫相关基因的表达 | 第50-52页 |
| ·棉铃虫鞣化激素基因的dsRNA干涉对棉铃虫免疫调控的影响 | 第52-54页 |
| ·dsRNA的合成 | 第52-53页 |
| ·dsRNA的注射 | 第53页 |
| ·Real Time PCR检测dsRNA处理后棉铃虫虫体中免疫相关基因的表达 | 第53-54页 |
| 4 结果与分析 | 第54-88页 |
| ·棉铃虫鞣化激素α亚基和β亚基基因的克隆与序列分析 | 第54-59页 |
| ·棉铃虫鞣化激素以及鞣化激素受体rickets基因的时空表达模式 | 第59-66页 |
| ·棉铃虫鞣化激素α亚基、β亚基在棉铃虫中枢神经系统各个神经节中的相对表达量分析 | 第59页 |
| ·棉铃虫鞣化激素受体rickets基因在棉铃虫不同组织中的相对表达量分析 | 第59-62页 |
| ·棉铃虫鞣化激素α亚基、β亚基以及鞣化激素受体rickets基因在棉铃虫各个生长发育时期的相对表达量分析 | 第62-66页 |
| ·棉铃虫胚胎发育过程中相关基因的表达分析 | 第66-74页 |
| ·转录组测序结果分析 | 第66-67页 |
| ·棉铃虫胚胎发育过程中相关基因的GO富集和KEGG分析 | 第67-69页 |
| ·棉铃虫胚胎发育过程中相关基因的差异表达分析 | 第69-74页 |
| ·棉铃虫酪氨酸羟化酶基因的序列分析 | 第74-79页 |
| ·棉铃虫酪氨酸羟化酶基因的序列 | 第74页 |
| ·棉铃虫酪氨酸羟化酶与其他昆虫酪氨酸羟化酶序列比对分析 | 第74-79页 |
| ·棉铃虫酪氨酸羟化酶基因的发育表达模式 | 第79-80页 |
| ·蜕皮激素受体EcR缺失对棉铃虫酪氨酸羟化酶基因表达的影响 | 第80-81页 |
| ·棉铃虫鞣化激素α亚基、β亚基融合蛋白在293T细胞中的表达以及Western blot鉴定 | 第81-82页 |
| ·鞣化激素α亚基同聚体、β亚基同聚体、α亚基β亚基异聚体蛋白及cAMP体外处理对棉铃虫脂肪体中酪氨酸羟化酶活性的影响 | 第82-83页 |
| ·棉铃虫鞣化激素α亚基、β亚基融合蛋白对棉铃虫免疫相关基因表达的影响 | 第83-86页 |
| ·注射鞣化激素β亚基dsRNA对棉铃虫免疫相关基因表达的影响 | 第86-88页 |
| 5 结论与讨论 | 第88-93页 |
| 参考文献(References) | 第93-99页 |
| ABSTRACT | 第99-102页 |
