| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 中英文缩写对照表 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-33页 |
| 1 引言 | 第19页 |
| 2 脂肪形成的概述 | 第19-32页 |
| ·脂肪细胞的发育过程 | 第19-21页 |
| ·脂肪的沉积部位及沉积顺序 | 第21-22页 |
| ·肌肉中的细胞类型 | 第22-23页 |
| ·脂肪细胞分化过程中的关键基因 | 第23-28页 |
| ·SPEBPs结构及其功能 | 第23-24页 |
| ·C/EBPs结构及其功能 | 第24-25页 |
| ·PPAR家族 | 第25-28页 |
| ·KLFs家族 | 第28页 |
| ·Wnt信号通路 | 第28-30页 |
| ·Wnt/p-catenin信号 | 第28-29页 |
| ·PPAPγ与β-catenin的关系 | 第29页 |
| ·Wnt信号通路的配基 | 第29-30页 |
| ·细胞定型过程中的重要转录因子 | 第30页 |
| ·BMP4 | 第30页 |
| ·BMP7 | 第30页 |
| ·Myostatin(MSTN) | 第30-32页 |
| ·MSTN与肌形成 | 第30-31页 |
| ·MSTN与脂肪形成 | 第31页 |
| ·MSTN对脂肪细胞定型的作用 | 第31-32页 |
| ·多潜能间充质干细胞的脂肪分化过程中MSTN的表达调控 | 第32页 |
| 3 研究的目的意义 | 第32-33页 |
| 第二章 MSTN对C3H10T1/2细胞脂肪形成过程的相关研究 | 第33-57页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·溶液配制 | 第34页 |
| ·细胞培养与冻存 | 第34-35页 |
| ·油红O染色 | 第35页 |
| ·脂肪细胞的计数 | 第35页 |
| ·细胞转染 | 第35-36页 |
| ·Western blot分析 | 第36页 |
| ·实时定量PCR | 第36-37页 |
| ·MSTN作用的受体 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-52页 |
| ·C3H10T1/2的成脂诱导分化 | 第37-38页 |
| ·C3H10T1/2成脂诱导过程中MSTN的作用 | 第38-40页 |
| ·C3H10T1/2细胞成脂诱导前添加MSTN的作用 | 第40-42页 |
| ·AZCT处理C3H10T1/2细胞后成脂诱导过程中添加MSTN的作用 | 第42-44页 |
| ·AZCT处理C3H10T1/2细胞过程中添加MSTN后再成脂诱导 | 第44-46页 |
| ·MSTN结合的受体 | 第46-47页 |
| ·MSTN处理后蛋白的磷酸化情况 | 第47-49页 |
| ·MSTN对p38的磷酸化情况 | 第47-48页 |
| ·MSTN对Smad2的磷酸化情况 | 第48-49页 |
| ·MSTN对Smad3的磷酸化情况 | 第49页 |
| ·MSTN在C3H10T1/2细胞成肌诱导中p38-MAPK信号途径分析 | 第49-51页 |
| ·MSTN在C3H10T1/2细胞成肌诱导中Smad2/3信号途径的分析 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-57页 |
| ·MSTN对多潜能间充质干细胞脂肪分化的影响 | 第52-54页 |
| ·MSTN在C3H10T1/2细胞中结合的受体 | 第54页 |
| ·MSTN信号通路蛋白的磷酸化 | 第54-55页 |
| ·MSTN信号对C3H10T1/2细胞的肌形成作用 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第三章 MSTN对脂肪间充质干细胞及肌卫星细胞的成脂分化作用 | 第57-80页 |
| 1 引言 | 第57-58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-62页 |
| ·试验动物 | 第58页 |
| ·试剂配制 | 第58-59页 |
| ·试验仪器 | 第59页 |
| ·主要器皿及手术器械的准备 | 第59页 |
| ·细胞的分离及处理 | 第59-62页 |
| ·组织采样 | 第59-60页 |
| ·酶消化法 | 第60页 |
| ·组织块培养法 | 第60页 |
| ·细胞的传代培养 | 第60页 |
| ·细胞的免疫化学染色 | 第60页 |
| ·肌卫星细胞成肌诱导 | 第60-61页 |
| ·细胞成脂诱导 | 第61页 |
| ·MSTN对细胞成脂诱导的作用 | 第61-62页 |
| ·数据处理 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-76页 |
| ·用酶消化法分离的肌卫星细胞形态学鉴定 | 第62-63页 |
| ·组织块培养法分离肌卫星细胞 | 第63页 |
| ·肌卫星细胞的免疫化学染色 | 第63-64页 |
| ·肌卫星细胞的成肌诱导分化 | 第64-65页 |
| ·肌卫星细胞成脂诱导分化 | 第65-66页 |
| ·MSTN重组蛋白对肌卫星细胞的成脂分化作用 | 第66-70页 |
| ·诱导分化前添加MSTN | 第66-67页 |
| ·肌卫星细胞成脂诱导时MSTN对它的脂肪形成作用 | 第67-68页 |
| ·MSTN在肌卫星细胞成脂诱导中对脂肪标志基因的影响 | 第68-70页 |
| ·脂肪间充质干细胞的分离鉴定 | 第70页 |
| ·脂肪间充质干细胞的免疫化学鉴定 | 第70-71页 |
| ·脂肪间充质干细胞的成脂诱导分化 | 第71-72页 |
| ·MSTN重组蛋白对脂肪间充质干细胞的成脂分化作用 | 第72-76页 |
| ·诱导分化前添加MSTN | 第72-73页 |
| ·脂肪间充质干细胞成脂诱导过程中MSTN对它的脂肪形成作用 | 第73-74页 |
| ·MSTN对脂肪间充质干细胞脂肪发育过程中相关基因的影响 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| ·肌卫星细胞的分离及鉴定 | 第76页 |
| ·肌卫星细胞的成肌与成脂分化能力 | 第76-77页 |
| ·MSTN对肌卫星细胞的成脂分化能力影响 | 第77-78页 |
| ·脂肪间充质干细胞的分离鉴定 | 第78页 |
| ·MSTN对脂肪间充质干细胞的成脂分化影响 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第四章 MSTN基因的表达调控 | 第80-105页 |
| 1 引言 | 第80-81页 |
| 2 材料与方法 | 第81-90页 |
| ·试验动物 | 第81页 |
| ·细胞株、菌株、质粒 | 第81页 |
| ·实验试剂 | 第81-82页 |
| ·猪血液基因组DNA提取 | 第82-83页 |
| ·RNA样品的提取、第一链cDNA的合成及反转录质量检测 | 第83页 |
| ·启动子的片断的获得 | 第83-85页 |
| ·启动子区域结合元件分析 | 第85-86页 |
| ·启动子不同缺失片断载体的构建 | 第86页 |
| ·含不同缺失片段的载体及pGL3-Basic载体双酶切 | 第86页 |
| ·重组载体的构建 | 第86页 |
| ·细胞转染 | 第86-87页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第87-88页 |
| ·MyoD和PPARγ超表达载体的构建 | 第88-90页 |
| ·MyoD、PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ等超表达载体与MSTN启动子活性的研究 | 第90页 |
| ·脂肪诱导培养基对MSTN启动子的转录活性影响研究 | 第90页 |
| ·数据分析 | 第90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-99页 |
| ·MSTN启动子片断的扩增及生物信息学分析 | 第90-91页 |
| ·MSTN启动子区域的生物信息学分析 | 第91-92页 |
| ·启动子不同缺失片断载体的构建 | 第92-93页 |
| ·MyoD及PPARγ真核表达质粒鉴定 | 第93-95页 |
| ·不同缺失片断载体转染C2C12细胞及肌管转录活性分析 | 第95-96页 |
| ·转录因子MyoD对启动子转录活性的分析 | 第96-97页 |
| ·脂肪诱导培养基对MSTN基因启动子的影响 | 第97-98页 |
| ·DIM的不同组分对MSTN启动子活性影响 | 第98-99页 |
| ·脂肪相关转录因子对MSTN启动子转录活性的影响 | 第99页 |
| 4 讨论 | 第99-105页 |
| ·MSTN启动子区域的生物信息学分析 | 第99-100页 |
| ·肌肉相关因子对MSTN启动子转录活性影响 | 第100-102页 |
| ·脂肪诱导条件下MSTN启动子转录活性分析 | 第102页 |
| ·脂肪诱导培养基各因子对MSTN启动子转录活性影响 | 第102-103页 |
| ·小结 | 第103-105页 |
| 第五章 MSTN信号通路对脂肪组织发育的影响 | 第105-117页 |
| 1 前言 | 第105-106页 |
| 2 材料与方法 | 第106-108页 |
| ·样品的采集 | 第106页 |
| ·RNA样品提取及第一链cDNA的合成及检测 | 第106页 |
| ·实时定量PCR | 第106-107页 |
| ·mRNA相对表达量分析 | 第107页 |
| ·数据分析 | 第107-108页 |
| 3 结果与分析 | 第108-113页 |
| ·RNA质量检测 | 第108页 |
| ·cDNA质量检测 | 第108-109页 |
| ·扩增曲线及熔解曲线分析 | 第109-110页 |
| ·MSTN及其受体在背最长肌中表达趋势分析 | 第110页 |
| ·MSTN及其受体在背脂及腹部脂肪中表达趋势分析 | 第110-111页 |
| ·PPARγ在背最长肌、腹脂和背脂肪中的表达趋势分析 | 第111-112页 |
| ·aP2在背最长肌、腹脂和背脂中的表达趋势分析 | 第112页 |
| ·三个组织中MSTN和ACTRⅡB的表达与aP2和PPARγ的相关性分析 | 第112-113页 |
| 4 讨论 | 第113-117页 |
| ·脂肪组织RNA提取 | 第113-114页 |
| ·MSTN及其受体在肌肉组织中的表达分析 | 第114-115页 |
| ·MSTN及其受体在背部脂肪组织中的表达分析 | 第115页 |
| ·MSTN及其受体在腹部脂肪组织中的表达分析 | 第115-116页 |
| ·PPARγ和aP2在三个组织中的表达情况分析 | 第116页 |
| ·小结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-127页 |
| 主要创新点 | 第127页 |
| 下一步工作计划 | 第127-128页 |
| 在读期间发表论文题录 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
