| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-24页 |
| ·微藻产油的研究背景 | 第9-10页 |
| ·愈演愈烈的能源危机与环境问题 | 第9页 |
| ·环境友好且可再生的生物质能 | 第9-10页 |
| ·微藻产油的优势 | 第10-11页 |
| ·微藻产油现存的问题 | 第11页 |
| ·生产成本高和能耗大 | 第11页 |
| ·缺乏合适的产油藻株和藻油提取技术 | 第11页 |
| ·微藻产油研究的变革 | 第11-13页 |
| ·优良藻株的筛选 | 第12页 |
| ·培养条件的优化 | 第12页 |
| ·诱变育种 | 第12-13页 |
| ·微藻基因改造技术 | 第13页 |
| ·微藻油脂代谢的过程 | 第13-14页 |
| ·微藻产油的关键基因 | 第14-18页 |
| ·磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) | 第15-16页 |
| ·柠檬酸合成酶(CIS) | 第16页 |
| ·磷脂—二脂酰甘油酰基转移酶(PDAT) | 第16-17页 |
| ·磷脂酸磷酸酯酶(PAP) | 第17-18页 |
| ·关键基因研究采用的技术手段 | 第18-21页 |
| ·RNAi技术 | 第18-21页 |
| ·过量表达技术 | 第21页 |
| ·亚细胞定位技术 | 第21页 |
| ·原核表达体系 | 第21页 |
| ·本文研究目的 | 第21-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2 实验材料与方法 | 第24-48页 |
| ·实验材料与试剂 | 第24-30页 |
| ·微藻材料 | 第24页 |
| ·实验中所使用的仪器 | 第24页 |
| ·大肠杆菌菌株及载体 | 第24-26页 |
| ·实验所用的试剂及培养基 | 第26-30页 |
| ·实验方法 | 第30-48页 |
| ·藻株选择及培养条件 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌培养条件 | 第31页 |
| ·提取莱茵衣藻CC425 RNA | 第31-32页 |
| ·RNA反转录成cDNA | 第32-33页 |
| ·CrPEPC1、CrCIS、CrPDAT3和CrPAP2基因干涉片段的克隆与RNA干扰载体的构建 | 第33-38页 |
| ·RNAi载体转化莱茵衣藻CC425及转化子筛选 | 第38-39页 |
| ·莱茵衣藻CC425基因沉默转化子的检测 | 第39-41页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因全长的克隆与各类载体的构建 | 第41-44页 |
| ·PEPC1、CIS和PAP2基因的亚细胞定位 | 第44-45页 |
| ·PEPC1、CIS和PAP2基因在莱茵衣藻中的过量表达及检测 | 第45页 |
| ·PEPC1、CIS和PAP2基因的原核表达 | 第45-48页 |
| 3 实验结果与分析 | 第48-71页 |
| ·莱茵衣藻CrPEPC1、CrCIS、CrPDAT3和CrPAP2基因干涉片段和基因全长的克隆 | 第48-50页 |
| ·莱茵衣藻CC425总RNA的提取 | 第48-49页 |
| ·测序结果分析 | 第49-50页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因的原核表达与检测 | 第50-54页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因原核表达载体的诱导表达 | 第51-53页 |
| ·蛋白纯化 | 第53页 |
| ·纯化蛋白的酶活测定 | 第53-54页 |
| ·RNAI表达载体的构建、转化及检测 | 第54-63页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第54-57页 |
| ·RNAi表达载体转化莱茵衣藻CC425 | 第57-58页 |
| ·RNAi表达载体转化子的检测 | 第58-63页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因细胞定位载体和过量表达载体的构建、转化及检测 | 第63-71页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因细胞定位载体和过量表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因细胞定位载体转化轰击白和洋葱表皮细胞 | 第64页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因细胞定位载体转化莱茵衣藻CC425 | 第64-66页 |
| ·PEPC1、PAP2和CIS基因过量表达载体转化莱茵衣藻CC425 | 第66页 |
| ·过量表达载体转化子的检测 | 第66-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| ·关于目标基因的原核表达 | 第71页 |
| ·关于目标基因的沉默与过量表达 | 第71-73页 |
| ·关于目标基因的沉默 | 第71-73页 |
| ·关于目标基因(PAP2、PEPC1和CIS)的过量表达 | 第73页 |
| ·关于基因表达产物的细胞定位 | 第73-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
