| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 山羊β-乳球蛋白与BLG基因研究概况 | 第10-12页 |
| ·β-乳球蛋白的结构 | 第10-11页 |
| ·β乳球蛋白的致敏性,对其传统的理化消除方法及局限性 | 第11页 |
| ·BLG基因的结构 | 第11-12页 |
| ·分子育种方法消除β-乳球蛋白影响的尝试 | 第12页 |
| 2 锌指核酸酶研究概况 | 第12-18页 |
| ·锌指结构的特点 | 第12-13页 |
| ·锌指核酸酶的结构与作用原理 | 第13-15页 |
| ·锌指核酸酶的构建过程 | 第15-18页 |
| ·锌指核酸酶在动物基因组修饰中的应用 | 第18页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 锌指核酸酶的构建与模块拼装法的技术优化 | 第20-42页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器及实验器械 | 第21页 |
| ·网络资源及软件 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-31页 |
| ·重叠PCR构建锌指模块 | 第22-28页 |
| ·锌指模块与非特异性核酸酶的拼装 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第30页 |
| ·质粒提取 | 第30-31页 |
| ·锌指核酸酶的分子建模模拟 | 第31页 |
| 3 实验结果 | 第31-40页 |
| ·锌指模块的设计 | 第32-34页 |
| ·重叠PCR构建锌指模块 | 第34-36页 |
| ·锌指核酸酶的构建 | 第36-38页 |
| ·锌指核酸酶的分子建模与打靶效率预测 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 锌指核酸酶在山羊成纤维细胞中敲除BLG基因的研究 | 第42-60页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| ·细胞及其来源 | 第42页 |
| ·网络资源及软件 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·仪器设备 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-50页 |
| ·山羊胎儿皮肤成纤维细胞的培养 | 第43-44页 |
| ·锌指核酸酶质粒的转染 | 第44-45页 |
| ·转染效率统计 | 第45页 |
| ·DAPI染色与细胞观察 | 第45页 |
| ·细胞计数 | 第45页 |
| ·细胞基因组提取 | 第45-46页 |
| ·靶目标片段的扩增 | 第46-47页 |
| ·靶片段的突变检测 | 第47页 |
| ·锌指核酸酶的体外转录 | 第47-50页 |
| 3 结果 | 第50-57页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的培养 | 第50页 |
| ·细胞转染效率的优化以及锌指核酸酶转染山羊成纤维细胞 | 第50-52页 |
| ·锌指核酸酶介导的细胞突变检测 | 第52-55页 |
| ·锌指核酸酶的体外转录 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 全文结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第70-71页 |
