| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 縮略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-31页 |
| ·蓝细菌简介 | 第10-11页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120异形胞发育进程简述 | 第11-19页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120异形胞形态及生理特点 | 第11-12页 |
| ·异形胞发育进程 | 第12-19页 |
| ·细菌的酪氨酸磷酸化 | 第19-30页 |
| ·细菌型酪氨酸激酶(BY-kinases) | 第20-24页 |
| ·酪氨酸磷酸酶 | 第24-28页 |
| ·BY-kinases和LMW-PTP的生理功能 | 第28-30页 |
| ·研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第31-33页 |
| ·培养基配方以及培养条件 | 第33-34页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第34页 |
| ·缓冲液和反应试剂 | 第34-35页 |
| ·E.coli感受态细胞制备试剂 | 第34页 |
| ·蛋白质纯化试剂 | 第34页 |
| ·磷酸化反应试剂 | 第34-35页 |
| ·Western Blot试剂 | 第35页 |
| ·蛋白胶银染溶液 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-47页 |
| ·质粒DNA的制备及相关操作 | 第35页 |
| ·质粒构建 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第36-37页 |
| ·His-tag融合蛋白质的诱导和纯化 | 第37-38页 |
| ·Bradford法蛋白质定量 | 第38-39页 |
| ·蛋白激酶的自磷酸化和底物磷酸化反应 | 第39页 |
| ·磷酸酶去磷酸化反应 | 第39页 |
| ·磷酸酶活性测定 | 第39页 |
| ·PULL-DOWN实验 | 第39-40页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第40-41页 |
| ·蛋白胶的银染 | 第41页 |
| ·Western Blot | 第41-42页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120总DNA的抽提 | 第42页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120的三亲本杂交 | 第42-43页 |
| ·接合转移子的验证 | 第43页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120的缺氮诱导 | 第43-44页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120 RNA的提取和纯化 | 第44页 |
| ·反转录RNA及实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT PCR) | 第44页 |
| ·固氮酶活性的测定 | 第44-45页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120胞外多糖的提取和测定 | 第45-46页 |
| ·硫酸苯酚法测定多糖含量 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-71页 |
| ·BY-kinases和LMW-PTP的生物信息学分析与鉴定 | 第47-52页 |
| ·BY-kinases的生物信息学分析 | 第47-50页 |
| ·LMW-PTPs的生物信息学分析与鉴定 | 第50-52页 |
| ·BY-kinases和LMW-PTP的体外酶活鉴定 | 第52-56页 |
| ·BY-kinases自磷酸化活性检测 | 第52-53页 |
| ·LMW-PTPs体外磷酸酶活性检测 | 第53-56页 |
| ·Alr5068参与了鱼腥蓝细菌PCC 7120异形胞外壁特异性多糖层的形成 | 第56-64页 |
| ·Alr5068超表达菌株Ox5068的构建 | 第56-57页 |
| ·超表达菌株Ox5068的表型观察 | 第57-58页 |
| ·Alr5068点突变超表达菌株的构建 | 第58-59页 |
| ·Alr5068点突变超表达菌株OxR15K的表型 | 第59-60页 |
| ·OxR15K的超微结构 | 第60页 |
| ·Ox5068和OxR15K的固氮酶活性 | 第60-62页 |
| ·Ox5068和OxR15K菌株中多糖合成相关基因hepA和hepC的转录 | 第62-63页 |
| ·alr5068基因缺氮诱导后的转录水平 | 第63-64页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120中BY-kinases的基因功能研究 | 第64-67页 |
| ·BY-kinases的缺失突变体和超表达菌株的构建与筛选 | 第64-65页 |
| ·BY-kinases的缺失突变体和超表达菌株缺氮后的表型 | 第65-66页 |
| ·BY-kinases的缺失突变体和超表达菌株总糖含量的测定 | 第66-67页 |
| ·在鱼腥蓝细菌PCC 7120中寻找Alr5068互作蛋白 | 第67-71页 |
| ·Alr5068双点突变蛋白的获得 | 第68-69页 |
| ·突变蛋白Alr5068CD与作用底物共纯化 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| ·Alr5068是一个典型的LMW-PTP,在鱼腥蓝细菌PCC 7120基因组中具有不可替代的地位 | 第71-72页 |
| ·BY-kinases家族的基因功能 | 第72-73页 |
| ·Alr5068在异形胞特异性多糖形成过程中的作用 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-86页 |
| 附录一 本实验中所用引物 | 第86-88页 |
| 附录二 p35蛋白条带质谱结果 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
