| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 1前言 | 第10-22页 |
| ·植物油脂代谢研究 | 第10-12页 |
| ·饱和脂肪酸合成基因工程 | 第11页 |
| ·脂肪酸去饱和酶基因工程 | 第11-12页 |
| ·三酰甘油组装酶基因工程 | 第12页 |
| ·乙酰辅酶A羧化酶(ACC)简介 | 第12-19页 |
| ·ACC的分类 | 第12-15页 |
| ·ACC的生物学功能及表达调控 | 第15-17页 |
| ·动物组织中ACC的功能与应用 | 第15-16页 |
| ·植物组织中ACC的功能与应用 | 第16-17页 |
| ·微生物组织中ACC的功能与应用 | 第17页 |
| ·ACC的表达调控 | 第17页 |
| ·ACC抑制剂及机理研究 | 第17-19页 |
| ·动物ACC抑制剂及作用机理 | 第17-18页 |
| ·植物除草剂及作用机理 | 第18页 |
| ·其它类型ACC抑制剂及作用机理 | 第18-19页 |
| ·乙酰辅酶A羧化酶基因克隆及基因工程研究进展 | 第19-21页 |
| ·异质型ACC基因克隆及基因工程研究进展 | 第19-20页 |
| ·同质型ACC基因克隆及基因工程研究进展 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·粘红酵母ACC基因的克隆 | 第23-28页 |
| ·引物设计、合成及测序 | 第23-24页 |
| ·粘红酵母基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·简并引物克隆ACC基因部分基因组DNA序列 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α感受态的制备 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第26页 |
| ·Genome walking酶切文库的构建 | 第26页 |
| ·Genome walking酶切文库连接Adaptors | 第26-27页 |
| ·基于PCR的染色体步移法 | 第27-28页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因的独立表达 | 第28-31页 |
| ·粘红酵母总RNA的提取 | 第28页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第30页 |
| ·双酶切重组质粒 | 第30页 |
| ·切胶回收目的片段 | 第30-31页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因原核表达载体的构建 | 第31页 |
| ·转化宿主菌株 | 第31页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第31页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因的共表达 | 第31-33页 |
| ·共表达的三个功能域基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·共表达载体的构建 | 第32页 |
| ·转化表达菌株 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·重组表达菌株脂肪酸含量的测定 | 第33-34页 |
| ·粘红酵母ACC cDNA全长表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·粘红酵母ACC基因的编码区域的分段扩增 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPICZα-EK-KS-SX的构建 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-54页 |
| ·粘红酵母ACC基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·乙酰辅酶A羧化酶氨基酸序列的比对分析 | 第36页 |
| ·粘红酵母乙酰辅酶A羧化酶基因部分序列的克隆 | 第36-37页 |
| ·基于PCR技术的染色体步移 | 第37-38页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因的独立表达 | 第38-43页 |
| ·粘红酵母总RNA的获得 | 第38-39页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因独立表达载体的构建及验证 | 第40-42页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因的独立表达 | 第42-43页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因共表达 | 第43-50页 |
| ·共表达载体的构建及验证 | 第43-48页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测三个功能域基因的共表达 | 第48-50页 |
| ·脂肪酸分析 | 第50-52页 |
| ·粘红酵母ACC cDNA全长表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·长片段未知基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·不同表达条件对蛋白活性的影响 | 第55页 |
| ·粘红酵母ACC三个功能域基因对脂肪酸合成的影响 | 第55-57页 |
| 5 总结与展望 | 第57-58页 |
| ·总结 | 第57页 |
| ·展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间已发表的论文 | 第67页 |
