| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-24页 |
| ·伪狂犬病对家畜的影响 | 第14-15页 |
| ·历史上的发现 | 第14页 |
| ·在非自然宿主中伪狂犬病感染的致死性 | 第14-15页 |
| ·伪狂犬病的世界分布 | 第15页 |
| ·病毒的分类 | 第15-16页 |
| ·病毒的命名 | 第15页 |
| ·疱疹病毒和α-疱疹病毒 | 第15-16页 |
| ·PRV的分子生物学特性 | 第16-17页 |
| ·病毒粒子的结构 | 第16页 |
| ·囊膜蛋白 | 第16-17页 |
| ·PRV对猪的急性感染 | 第17页 |
| ·疱疹病毒受体nectin-1的一般生物学特性 | 第17-19页 |
| ·细胞黏附分子 | 第17页 |
| ·免疫球蛋白超家族 | 第17-18页 |
| ·Nectin-1的定义及其细胞黏附作用 | 第18-19页 |
| ·转基因动物研究简介 | 第19-22页 |
| ·转基因技术的概念 | 第19页 |
| ·转基因技术的发展 | 第19页 |
| ·常用的动物转基因技术 | 第19-22页 |
| ·转基因动物的应用与展望 | 第22-24页 |
| ·转基因动物的概念 | 第22页 |
| ·转基因技术在动物育种中的应用 | 第22-23页 |
| ·转基因动物在医药科学研究中的应用 | 第23页 |
| ·转基因动物研究存在的问题 | 第23-24页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-42页 |
| ·实验材料 | 第25-32页 |
| ·病毒、细胞和菌株 | 第25页 |
| ·载体与质粒 | 第25-28页 |
| ·工具酶、主要试剂和试剂盒 | 第28页 |
| ·主要培养基的配制 | 第28-29页 |
| ·主要缓冲液的配制 | 第29-32页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-42页 |
| ·RNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-33页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·质粒的小量制备 | 第34-35页 |
| ·质粒的大量制备 | 第35页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第35页 |
| ·诱导表达 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
| ·Western blotting | 第36页 |
| ·包涵体提取 | 第36-37页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第37页 |
| ·ELISA试验 | 第37页 |
| ·脂质体介导的细胞转染 | 第37-38页 |
| ·稳定表达细胞系的建立 | 第38页 |
| ·提取PK-15细胞总蛋白 | 第38页 |
| ·病毒的增殖 | 第38-39页 |
| ·病毒滴度(PFU)的测定 | 第39页 |
| ·病毒生长曲线的测定(一步法增殖曲线) | 第39页 |
| ·超离获取慢病毒粒子 | 第39-40页 |
| ·用超离法转导PK-15细胞 | 第40页 |
| ·用慢病毒感染法获取转基因猪 | 第40页 |
| ·从转基因猪胚胎组织中提取高分子量DNA(无酚/氯仿法) | 第40页 |
| ·统计软件 | 第40-42页 |
| 第4章 结果与分析 | 第42-53页 |
| ·猪nectin-1的克隆、测序及序列分析 | 第42-44页 |
| ·猪nectin-1的RT-PCR扩增 | 第42页 |
| ·猪nectin-1序列测定及分析 | 第42页 |
| ·同源性比较及系统发育树绘制 | 第42-43页 |
| ·跨膜区预测 | 第43-44页 |
| ·猪nectin-1胞外区在大肠杆菌中的表达 | 第44-46页 |
| ·猪nectin-1胞外区的PCR扩增 | 第44页 |
| ·pGEX-6p-1-nectin-1-ecto原核表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·猪nectin-1-ecto融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| ·猪nectin-1-ecto原核表达产物的Western blot分析 | 第46页 |
| ·猪nectin-1-ecto融合蛋白的纯化和多克隆抗体的制备 | 第46页 |
| ·稳定表达猪nectin-1-ecto的PK-15细胞系的构建 | 第46-49页 |
| ·pCA-nectin-1-ecto真核表达质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·稳定表达猪nectin-1-ecto的PK-15细胞系的构建 | 第47页 |
| ·间接免疫荧光检测猪nectin-1-ecto在PK-15细胞系中的表达 | 第47-48页 |
| ·Western blot检测猪nectin-1-ecto在PK-15细胞系中的表达 | 第48页 |
| ·猪nectin-1-ecto稳定表达PK-15细胞系抑制病毒增殖实验 | 第48-49页 |
| ·慢病毒转导的PK-15细胞系的构建 | 第49-51页 |
| ·pLenti7.3CA重组质粒的构建 | 第49-50页 |
| ·pLenti7.3CA-nectin-1-ecto真核表达质粒的构建 #43. | 第50页 |
| ·慢病毒病毒粒子的获取 | 第50页 |
| ·慢病毒转导的PK-15细胞系的筛选 | 第50-51页 |
| ·两种细胞系抑制病毒增殖试验的比较 | 第51-52页 |
| ·两种细胞系抑制病毒增殖试验 | 第51页 |
| ·两种细胞系一步法增殖曲线试验 | 第51-52页 |
| ·两种细胞系的蛋白量表达情况 | 第52页 |
| ·慢病毒载体重组质粒在转基因动物中的试验 | 第52-53页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第53-58页 |
| ·讨论 | 第53-57页 |
| ·PRV受体nectin-1基因的克隆与分子特征分析 | 第53-54页 |
| ·猪nectin-1胞外区基因的克隆与原核表达 | 第54页 |
| ·表达猪nectin-1胞外区基因的PK-15细胞系的构建 | 第54-55页 |
| ·慢病毒转导的PK-15细胞系的构建 | 第55-56页 |
| ·两种细胞系抑制病毒增殖试验的比较 | 第56页 |
| ·慢病毒载体重组质粒在转基因动物中的试验 | 第56-57页 |
| ·结果 | 第57页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
