| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-17页 |
| ·研究背景 | 第10-11页 |
| ·纤维素基本介绍 | 第11页 |
| ·纤维素酶 | 第11-13页 |
| ·纤维素酶的组成和催化机制 | 第12-13页 |
| ·内切葡聚糖酶 | 第13页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第13页 |
| ·产纤维素酶菌株和纤维素酶基因的多样性 | 第13-15页 |
| ·纤维素酶的基因工程改造 | 第15页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第2章 内切葡聚糖酶的克隆与表达 | 第17-33页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·实验材料 | 第17-21页 |
| ·克隆表达所用菌种及质粒 | 第17页 |
| ·目的基因及来源菌种 | 第17-19页 |
| ·仪器与试剂 | 第19页 |
| ·主要生物试剂和化学试剂 | 第19页 |
| ·主要溶液 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·基因组的提取,引物设计,PCR | 第21-22页 |
| ·T载体连接 | 第22页 |
| ·表达系统的构建 | 第22-24页 |
| ·重组内切葡聚糖酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第24页 |
| ·重组内切葡聚糖酶SDS-PAGE分析 | 第24页 |
| ·酶活测定 | 第24-25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-32页 |
| ·内切葡聚糖酶的数据库检索和筛选 | 第25页 |
| ·目的基因的克隆 | 第25-29页 |
| ·表达载体构建 | 第29-31页 |
| ·重组菌株的诱导表达及内切葡聚糖酶酶活检测 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 重组内切葡聚糖酶的纯化与酶学性质的研究 | 第33-45页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-35页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·主要溶液 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-44页 |
| ·重组内切葡聚糖酶纯化 | 第35-36页 |
| ·酶学性质表征 | 第36-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 融合基因的构建 | 第45-53页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料与设备 | 第45页 |
| ·工程菌种及质粒 | 第45页 |
| ·目的基因及菌种来源 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·融合基因构建 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白表达与纯化 | 第46页 |
| ·融合蛋白酶学性质表征 | 第46页 |
| ·考马斯亮蓝法测定酶蛋白含量 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-52页 |
| ·融合基因设计 | 第46-47页 |
| ·融合基因构建 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白表达与纯化 | 第48-50页 |
| ·融合蛋白与非融合蛋白酶学性质比较 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白与非融合蛋白的酶活比较 | 第51-52页 |
| ·动力学常数比较 | 第52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第5章 CEL5H蛋白表面静电势能模拟和耐盐性分析 | 第53-59页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-54页 |
| ·计算机环境和分子模拟软件 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-58页 |
| ·Ce15H的序列分析 | 第54-56页 |
| ·Ce15H表面静电势能分析 | 第56-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第6章 纤维素酶的复配 | 第59-64页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·材料与设备 | 第59页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第59页 |
| ·纤维素酶 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-60页 |
| ·CbhA的制备 | 第59页 |
| ·底物再生纤维素(PASC)制备配制 | 第59-60页 |
| ·内切葡聚糖酶与外切葡聚糖酶复配 | 第60页 |
| ·内切葡聚糖酶与外切葡聚糖酶复配最佳协同条件 | 第60页 |
| ·内切葡聚糖酶,外切葡聚糖酶,β-葡萄糖苷酶三者复配 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-63页 |
| ·内切葡聚糖酶与外切葡聚糖酶复配 | 第60-61页 |
| ·内切葡聚糖酶与外切葡聚糖酶复配最佳协同条件 | 第61-62页 |
| ·内切葡聚糖酶,外切葡聚糖酶,β-葡萄糖苷酶三者复配 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第7章 结论及展望 | 第64-66页 |
| ·论文总结 | 第64-65页 |
| ·实验展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
