| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟菌概述 | 第13页 |
| 2 MAP 蛋白酶概述 | 第13-16页 |
| ·MAP 蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·底物的识别与降解 | 第14-15页 |
| ·MAP 蛋白酶的功能 | 第15-16页 |
| 3 蛋白质间相互作用的研究 | 第16-19页 |
| ·蛋白质相互作用研究的目的及意义 | 第16页 |
| ·蛋白质间相互作用的研究方法 | 第16-19页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第一章 稻瘟菌 MAP 基因的克隆、原核表达以及纯化 | 第21-36页 |
| 1 试验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株及载体 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要培养基与试剂配制 | 第21-22页 |
| ·主要试验仪器 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-30页 |
| ·MAP 基因的克隆 | 第22-27页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·原核表达载体的鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒 pET28a::MAP 转入 E.coli BL21 | 第28页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第29页 |
| ·重组蛋白的可溶性鉴定 | 第29页 |
| ·可溶性蛋白亲和纯化 | 第29页 |
| ·包涵体蛋白亲和纯化 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-34页 |
| ·RT-PCR 扩增 MAP 结果 | 第30页 |
| ·pMD18-T::MAP 重组质粒 PCR 验证和双酶切验证结果 | 第30-31页 |
| ·序列分析 | 第31-33页 |
| ·重组质粒 pET28a::MAP PCR 鉴定与双酶切鉴定结果 | 第33页 |
| ·原核表达 | 第33-34页 |
| ·MAP 融合蛋白的亲和纯化 | 第34页 |
| 4 小结与讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 His Pull-down 筛选 MoMAP 互作蛋白 | 第36-43页 |
| 1 试验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要培养基与试剂配制 | 第36-37页 |
| ·主要试验仪器 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-39页 |
| ·稻瘟菌野生型菌株总蛋白的提取 | 第37页 |
| ·His pull-down 筛选 MoMAP 互作蛋白 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳鉴定互作蛋白 | 第38-39页 |
| ·质谱分析 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-40页 |
| ·稻瘟菌总蛋白的提取 | 第39页 |
| ·His pull-down 筛选 MoMAP 互作蛋白 | 第39-40页 |
| ·质谱分析 | 第40页 |
| 4 小结与讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 串联亲和纯化筛选 MoMAP 互作蛋白 | 第43-56页 |
| 1 试验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株和载体 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要培养基与试剂配制 | 第43-44页 |
| ·主要试验仪器 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-50页 |
| ·构建串联亲和纯化载体 | 第44-46页 |
| ·农杆菌介导串联亲和纯化载体（pBI:: promoter-MAP::TAP tag）转入稻瘟菌 | 第46-48页 |
| ·Mo-TAP 总蛋白的提取 | 第48页 |
| ·改造 TAP 标签 | 第48-49页 |
| ·串联亲和纯化筛选 MoMAP 互作蛋白 | 第49-50页 |
| ·质谱分析 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·构建串联亲和纯化载体结果 | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟菌转化转化子的验证结果 | 第51页 |
| ·Mo-TAP 总蛋白提取结果 | 第51-52页 |
| ·串联亲和纯化筛选 MoMAP 互作蛋白 | 第52页 |
| ·质谱分析 | 第52-53页 |
| 4 小结与讨论 | 第53-56页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 酵母双杂交验证 MoMAP 与互作蛋白的互作关系 | 第56-67页 |
| 1 试验材料 | 第56-57页 |
| ·菌株与载体 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要培养基和溶液配制 | 第56-57页 |
| ·主要试验仪器 | 第57页 |
| 2 试验方法 | 第57-61页 |
| ·稻瘟菌 cDNA 的获得 | 第57页 |
| ·RT-PCR 扩增诱饵蛋白基因与猎物蛋白基因 | 第57-59页 |
| ·酵母双杂交诱饵蛋白载体的构建 | 第59页 |
| ·酵母双杂交猎物蛋白载体的构建 | 第59-60页 |
| ·酵母双杂交重组载体 PCR 鉴定与酶切鉴定 | 第60页 |
| ·酵母双杂交载体小规模共转化酵母 AH109 | 第60-61页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-65页 |
| ·RT-PCR 扩增诱饵蛋白基因 MAP | 第61-62页 |
| ·RT-PCR 扩增猎物蛋白基因 | 第62页 |
| ·酵母双杂交重组载体 PCR 鉴定与酶切鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·共转化酵母 AH109，蛋白互作的检测 | 第63-65页 |
| 4 小结与讨论 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 结论与讨论 | 第67-69页 |
| 1 结论 | 第67页 |
| 2 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
