| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-27页 |
| ·两栖类抗菌肽研究 | 第12-13页 |
| ·两栖类抗菌肽(Antimicrobial Peptides,AMP)概述 | 第12-13页 |
| ·两栖类蛙科抗菌肽家族分类 | 第13页 |
| ·Cathelicidins的研究进展 | 第13-25页 |
| ·Cathelicidins的基因组成与结构 | 第13-15页 |
| ·Cathelicidins的物种分布 | 第15-17页 |
| ·Cathelicidins的表达与组织分布 | 第17-18页 |
| ·Cathelicidins与两栖类蛙科物种AMP酶切位点分析比较 | 第18-20页 |
| ·Cathelicidins成熟肽的结构多样性 | 第20-21页 |
| ·Cathelicidins成熟肽的抗微生物活性及机制 | 第21-24页 |
| ·Cathelicidins成熟肽的其他生物学活性 | 第24页 |
| ·Cathelicidins的应用前景及存在问题 | 第24-25页 |
| ·选题依据和研究内容 | 第25-27页 |
| ·选题依据 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| 2 脆皮大头蛙皮肤cathlicidins基因的克隆及序列分析 | 第27-44页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·动物、菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要实验仪器 | 第28页 |
| ·培养基和主要溶液 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·脆皮大头蛙皮肤cDNA文库的构建 | 第29-30页 |
| ·脆皮大头蛙皮肤cathelicidins基因的克隆 | 第30-34页 |
| ·脆皮大头蛙cathelicidins的鉴定 | 第34页 |
| ·Lf-CATHs的抗菌活性检测 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-43页 |
| ·总RNA和cDNA文库的检测 | 第35-36页 |
| ·脆皮大头蛙cathelicidins基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·测序分析 | 第38页 |
| ·成熟肽Lf-CATH1/2的鉴定与分析 | 第38-43页 |
| ·Lf-CATHs的抗微生物活性检测 | 第43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 3 脆皮大头蛙cathelicidins成熟肽的重新预测与原核表达 | 第44-67页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·主要实验仪器 | 第45页 |
| ·主要溶液 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-53页 |
| ·脆皮大头蛙Lf-CATHs酶切位点的重新推断 | 第46-47页 |
| ·成熟肽Lf-CATH1a/2a的理化性质预测 | 第47页 |
| ·Lf-CATH1a的基因克隆与重组质粒的构建 | 第47-50页 |
| ·含重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的获得 | 第50页 |
| ·pET-32α-Lf-CATH1a重组质粒的融合表达与鉴定 | 第50-52页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白的甲酸切割与Lf-CATH1a目标蛋白的纯化 | 第53页 |
| ·纯化得到的Lf-CATH1a目的蛋白的抗菌活性检测 | 第53页 |
| ·实验结果与讨论 | 第53-65页 |
| ·成熟肽Lf-CATH1a/2a的理化性质预测 | 第53-54页 |
| ·含酶切位点的Lf-CATH1a基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·Lf-CATH1a目的基因与pET-32a质粒双酶切电泳 | 第55-56页 |
| ·pET-32α-Lf-CATH1a重组质粒的筛选与鉴定 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白的表达与鉴定 | 第57-60页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第60-62页 |
| ·融合蛋白甲酸切割与Lf-CATH1a目的蛋白纯化 | 第62-64页 |
| ·大肠杆菌表达的Lf-CATH1a的抗菌活性分析 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 4 脆皮大头蛙cathelicidin成熟肽Lf-CATH1a的功能研究 | 第67-74页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·菌株和细胞 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要实验仪器 | 第67-68页 |
| ·主要溶液 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-70页 |
| ·Lf-GCATH1a多肽样品的准备 | 第68页 |
| ·抗微生物活性检测 | 第68页 |
| ·溶血活性检测 | 第68-69页 |
| ·凝集活性检测 | 第69页 |
| ·DPPH自由基清除活性检测 | 第69-70页 |
| ·实验结果与讨论 | 第70-73页 |
| ·抗微生物活性 | 第70-71页 |
| ·溶血活性 | 第71页 |
| ·凝集素活性 | 第71-72页 |
| ·DPPH自由基清除 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录A 实验所用菌种 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
