致谢 | 第4-8页 |
英文缩写词表 | 第8-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
文献综述 | 第11-20页 |
1 奶牛乳房炎综述 | 第11-12页 |
1.1 奶牛乳房炎的概况 | 第11页 |
1.2 奶牛乳房炎的病因 | 第11-12页 |
1.3 乳房炎的危害 | 第12页 |
1.4 乳房炎的防制 | 第12页 |
2 奶牛乳房炎的分子流行病学综述 | 第12-15页 |
2.1 细菌性因素 | 第13-15页 |
2.2 非细菌性因素 | 第15页 |
3 细菌密度感应系统(Quorum Sensing,QS)的简介 | 第15-20页 |
3.1 革兰氏阴性菌的信号系统 | 第16页 |
3.2 革兰氏阳性菌的信号系统 | 第16-17页 |
3.3 LuxS/AI-2群体感应系统 | 第17-18页 |
3.4 大肠杆菌的群体感应系统 | 第18-20页 |
试验一 奶牛乳房炎大肠杆菌AI-2信号分子检测 | 第20-30页 |
1 材料 | 第21-22页 |
1.1 菌种 | 第21页 |
1.2 主要试剂 | 第21页 |
1.3 培养基及配制 | 第21页 |
1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
2 方法 | 第22-24页 |
2.1 奶牛乳房炎的大肠杆菌中信号分子AI-2的制备 | 第22页 |
2.2 哈维弧菌BB170的培养 | 第22页 |
2.3 AI-2的活性检测 | 第22-23页 |
2.4 pfs和luxS mRNA水平检测 | 第23-24页 |
3 结果 | 第24-28页 |
3.1 不同的奶牛乳房炎大肠杆菌AI-2活性检测 | 第24页 |
3.2 不同生长时期E285株AI-2 活性检测 | 第24-25页 |
3.3 检测不同培养条件下E285株AI-2活性 | 第25-26页 |
3.4 E285株不同生长时期luxS与pfs mRNA水平检测 | 第26-27页 |
3.5 E285株不同培养条件下luxS基因和pfs基因mRNA的分析 | 第27-28页 |
4 讨论 | 第28-30页 |
试验二 AI-2信号分子luxS和pfs基因的表达 | 第30-43页 |
1 材料 | 第30-31页 |
1.1 材料 | 第30-31页 |
1.2 仪器 | 第31页 |
1.3 SDS-PAGE试剂及配制 | 第31页 |
2 方法 | 第31-35页 |
2.1 引物设计 | 第31页 |
2.2 大肠杆菌luxS和pfs基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
2.3 胶回收和质粒提取 | 第32页 |
2.4 PCR产物酶切 | 第32页 |
2.5 表达pET30a载体的酶切 | 第32页 |
2.6 连接 | 第32-33页 |
2.7 阳性菌落筛选 | 第33页 |
2.8 重组蛋白的诱导表达 | 第33页 |
2.9 SDS-PAGE | 第33-34页 |
2.10 重组蛋白纯化 | 第34页 |
2.11 多克隆抗体制备 | 第34页 |
2.12 Western-blotting | 第34-35页 |
3 结果 | 第35-41页 |
3.1 luxS和pfs基因的PCR扩增 | 第35页 |
3.2 重组质粒的鉴定 | 第35-40页 |
3.3 重组质粒pET30a-luxS和pET30a-pfs表达纯化 | 第40页 |
3.4 多克隆抗体制备和Western-blotting检测 | 第40-41页 |
4 讨论 | 第41-43页 |
全文总结 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-55页 |
ABSTRACT | 第55-57页 |