| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 综述部分 | 第11-20页 |
| 1 防御素的生物学活性及其作用机理 | 第11-14页 |
| ·防御素的生物学活性 | 第11-12页 |
| ·防御素的作用机理 | 第12-14页 |
| 2 β-防御素的研究进展 | 第14-17页 |
| ·β-防御素的分子结构和分布 | 第14-16页 |
| ·β-防御素的基因工程研究进展 | 第16-17页 |
| 3 防御素的应用现状 | 第17-19页 |
| ·在医药行业的应用 | 第17页 |
| ·在食品行业的应用 | 第17-18页 |
| ·在农业上的应用 | 第18页 |
| ·在畜牧业上的应用 | 第18-19页 |
| 4 主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·Gal-6原核工程菌的构建及表达制备 | 第19页 |
| ·Gal-1真核工程菌的构建及高拷贝筛选 | 第19-20页 |
| 第一部分 重组Gal-6在E.coli中的表达、纯化和抗菌活性研究 | 第20-41页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·主要工具酶及试剂盒 | 第20页 |
| ·其他相关试剂 | 第20页 |
| ·主要溶液及培养基的配制 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-31页 |
| ·Gal-6的克隆 | 第22-27页 |
| ·表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·重组质粒转化BL21 | 第28页 |
| ·融合蛋白的表达和纯化 | 第28-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第31页 |
| ·Gal-6基因片段的RT-PCR | 第31-32页 |
| ·pMD-18-Gal-6克隆载体的构建 | 第32-33页 |
| ·pET-28a-Gal-6表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第34-37页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 | 第38页 |
| ·活性检测 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| ·Gal-6的克隆 | 第39页 |
| ·重组蛋白的表达形式 | 第39页 |
| ·融合蛋白的表达条件探索 | 第39页 |
| ·融合蛋白的变复性 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·活性检测 | 第40-41页 |
| 第二部分 Gal-1真核表达载体的构建及高拷贝的筛选 | 第41-53页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·菌株与载体 | 第41页 |
| ·主要工具酶及试剂盒 | 第41页 |
| ·其他相关试剂 | 第41页 |
| ·主要溶液及培养基的配制 | 第41页 |
| ·仪器设备 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-47页 |
| ·Gal-6的克隆 | 第42-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44页 |
| ·质粒的大量抽提和单酶切 | 第44-45页 |
| ·GS115感受态的制备和电转化 | 第45-46页 |
| ·高拷贝重组子的筛选 | 第46-47页 |
| ·重组子表型的鉴定 | 第47页 |
| 3. 实验结果 | 第47-51页 |
| ·Gal-1基因片段的RT-PCR | 第47-48页 |
| ·pMD-18-Gal-1克隆载体的构建 | 第48页 |
| ·pPIC3.5K-Gal-1表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第49页 |
| ·高拷贝重组子的筛选 | 第49-51页 |
| ·重组子表型的鉴定 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| ·Gal-1的克隆 | 第51页 |
| ·表达载体的选择 | 第51页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第51页 |
| ·电转化 | 第51-52页 |
| ·高拷贝重组子的筛选 | 第52页 |
| ·重组子表型的鉴定 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 已发表或已录用的主要学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |