| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·纤维素酶的来源、分类、结构及协同作用 | 第10-12页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第10页 |
| ·纤维素酶的分类 | 第10-11页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第11页 |
| ·纤维素酶的催化机制与协同作用 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶的改造 | 第12-13页 |
| ·酶分子定向改造 | 第13-18页 |
| ·理性设计与非理性设计 | 第13-14页 |
| ·定向进化 | 第14-17页 |
| ·体外定向进化技术的起源与发展 | 第14-15页 |
| ·定向进化技术表达体系的选择 | 第15-16页 |
| ·选择/筛选方法论 | 第16-17页 |
| ·定点突变 | 第17-18页 |
| ·定点突变技术的起源、发展与应用 | 第17页 |
| ·同源建模(Homology modeling) | 第17-18页 |
| ·展望 | 第18-19页 |
| ·课题研究的意义及内容 | 第19-20页 |
| 第二章 纤维素酶的定向进化 | 第20-59页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·菌种及载体 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-39页 |
| ·毕赤酵母自主复制质粒载体pGAPZαB-PARS1-EG1的构建 | 第22-28页 |
| ·毕赤酵母KM71H基因组的提取 | 第23页 |
| ·pGAPZαB-PARS1载体构建 | 第23-27页 |
| ·pGAPZαB-PARS1-EGⅠ的构建 | 第27-28页 |
| ·自主复制质粒载体pGAPZαB-PARS1-EGⅠ的验证 | 第28-31页 |
| ·质粒碱法大量提取 | 第28-29页 |
| ·改进的毕赤酵母感受态制备及电转方法 | 第29-30页 |
| ·自主复制质粒载体的验证 | 第30-31页 |
| ·突变文库的构建与筛选 | 第31-35页 |
| ·ep-PCR条件的确定 | 第31-32页 |
| ·突变文库的构建 | 第32-35页 |
| ·突变基因文库电转化KM71H以及耐热型EGⅠ突变体的筛选 | 第35页 |
| ·耐热型纤维素酶EGⅠ突变体的酶学特性及基因序列分析 | 第35-39页 |
| ·纤维素酶活力的测定方法 | 第36-38页 |
| ·温度对纤维素酶EGⅠ突变体活性和稳定性的影响 | 第38-39页 |
| ·纤维素酶EGⅠ突变体的基因序列分析 | 第39页 |
| ·结果分析与讨论 | 第39-59页 |
| ·毕赤酵母自主复制质粒载体pGAPZαB-PARS1-EG1的构建 | 第39-45页 |
| ·毕赤酵母KM71H基因组的提取 | 第39页 |
| ·pGAPZαB-PARS1载体构建 | 第39-43页 |
| ·pGAPZαB-PARS1-EG1的构建 | 第43-45页 |
| ·自主复制质粒载体pGAPZαB-PARS1-EGⅠ的验证 | 第45-47页 |
| ·质粒大量提取 | 第45页 |
| ·改进的毕赤酵母感受态制备及电转方法 | 第45-46页 |
| ·自主复制质粒载体的验证 | 第46-47页 |
| ·突变文库的构建与筛选 | 第47-51页 |
| ·ep-PCR条件的确定 | 第47-48页 |
| ·突变文库的构建 | 第48-50页 |
| ·突变基因文库电转化KM71H以及耐热型EG1突变体的筛选 | 第50-51页 |
| ·耐热型纤维素酶EGⅠ突变体的酶学特性及序列分析 | 第51-57页 |
| ·温度对纤维素酶EGⅠ突变体活性和稳定性的影响 | 第51-53页 |
| ·纤维素酶EGⅠ突变体的序列分析 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 纤维素酶的定点突变 | 第59-77页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·菌种及载体 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·EGⅠ同源建模(homology modeling) | 第60页 |
| ·模板选择(Template selection) | 第60页 |
| ·建模(Modeling) | 第60页 |
| ·家族同源分析 | 第60页 |
| ·定点突变的构建 | 第60-64页 |
| ·定点突变SD1 | 第61-62页 |
| ·定点突变SD2、SD3和SD4 | 第62-64页 |
| ·定点突变基因电转化KM71H | 第64页 |
| ·耐热型纤维素酶EGⅠ突变体的酶学特性 | 第64页 |
| ·温度对纤维素酶EGⅠ突变体活性和稳定性的影响 | 第64页 |
| ·结果分析与讨论 | 第64-77页 |
| ·EGⅠ同源建模(Homology modeling) | 第64-67页 |
| ·模板选择(Template selection) | 第64-65页 |
| ·建模(Modeling) | 第65-67页 |
| ·家族同源分析 | 第67-69页 |
| ·定点突变的构建 | 第69-74页 |
| ·定点突变SD1 | 第69-70页 |
| ·定点突变SD2、SD3和SD4 | 第70-72页 |
| ·定点突变基因电转化KM71H | 第72-74页 |
| ·耐热型纤维素酶EGⅠ突变体的酶学特性 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| 第四章 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 详细摘要 | 第81-82页 |
| Abstract | 第82页 |
