| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1.前言 | 第12-24页 |
| ·猪链球菌病 | 第12-13页 |
| ·猪链球菌2型新型毒力因子的研究进展 | 第13-17页 |
| ·血清浑浊因子OFS | 第13页 |
| ·次黄嘌呤核苷酸脱氢酶IMPDH | 第13页 |
| ·肽聚糖PG | 第13-14页 |
| ·毒力岛PAI | 第14页 |
| ·唾液酸合成酶 | 第14页 |
| ·超氧化物歧化酶SOD | 第14-15页 |
| ·正向调节因子AdcR和Fur | 第15页 |
| ·lin0523基因 | 第15页 |
| ·菌毛亚单位与分选酶Srt | 第15-16页 |
| ·IgA1蛋白酶 | 第16页 |
| ·枯草芽孢杆菌样丝氨酸蛋白酶SspA | 第16页 |
| ·触发因子Tig | 第16页 |
| ·103脂蛋白 | 第16页 |
| ·内皮素转换酶SsPep | 第16-17页 |
| ·猪链球菌2型转录调节因子研究进展 | 第17-18页 |
| ·转录调节因子Rgg | 第17页 |
| ·糖代谢调节因子CcpA | 第17页 |
| ·调节因子LuxS | 第17页 |
| ·双组份调控系统TCS | 第17-18页 |
| ·转录调节因子CodY研究进展 | 第18-24页 |
| ·CodY结构分析 | 第18-19页 |
| ·CodY对细菌代谢的调控 | 第19-21页 |
| ·CodY对细菌毒力的调控 | 第21-22页 |
| ·CodY在链球菌属中的研究进展 | 第22-24页 |
| 2.研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 3.材料与方法 | 第25-46页 |
| ·材料 | 第25-33页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第25-28页 |
| ·动物和细胞 | 第28页 |
| ·主要药品、试剂、试剂盒与仪器 | 第28-29页 |
| ·主要培养基及抗生素配制 | 第29-30页 |
| ·主要溶液配制 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33-34页 |
| ·猪链球菌2型的复苏增殖及基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增 | 第35页 |
| ·DNA的纯化与回收 | 第35页 |
| ·DNA与载体的连接反应 | 第35页 |
| ·连接产物的转化(氯化钙转化法) | 第35-36页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第36页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第37页 |
| ·蛋白质的鉴定(SDS-PAGE) | 第37-38页 |
| ·蛋白纯化 | 第38页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第38页 |
| ·电泳迁移率实验(EMSA) | 第38-39页 |
| ·RNA的提取 | 第39页 |
| ·反转录PCR | 第39页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·猪链球菌2型感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·猪链球菌2型的电转化 | 第40页 |
| ·突变株的筛选和鉴定 | 第40-41页 |
| ·生长曲线比较 | 第41页 |
| ·菌落形态和溶血活性的比较 | 第41-42页 |
| ·细菌透射电子显微镜观察 | 第42页 |
| ·唾液酸含量的检测 | 第42页 |
| ·细胞感染实验 | 第42-43页 |
| ·中性粒细胞(PMN)介导的杀菌实验 | 第43-44页 |
| ·小鼠的半数致死量实验 | 第44页 |
| ·感染组织载菌量测定 | 第44页 |
| ·基因芯片 | 第44-46页 |
| 4.结果与分析 | 第46-65页 |
| ·CodY突变株的构建与鉴定,蛋白表达和纯化 | 第46-50页 |
| ·重组质粒pSET4s-codY’的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·表达质粒pET28a-codY构建及鉴定 | 第47页 |
| ·CodY蛋白表达及纯化 | 第47-48页 |
| ·突变株ΔcodY的筛选与鉴定 | 第48-50页 |
| ·突变株ΔcodY生物学特性研究 | 第50-58页 |
| ·生长速率分析 | 第50-51页 |
| ·微生物菌落形态和溶血活性分析 | 第51-52页 |
| ·突变株ΔcodY透射电镜观察 | 第52-53页 |
| ·突变株ΔcodY对细胞的粘附和侵入 | 第53-55页 |
| ·猪中性粒细胞(PMN)和巨噬细胞介导的杀菌实验 | 第55-56页 |
| ·突变株ΔcodY对Babl/c小鼠致病力的检测 | 第56-58页 |
| ·CodY转录调节因子对猪链球菌2型毒力调控的初步探讨 | 第58-65页 |
| ·基因芯片结果 | 第58-61页 |
| ·实时荧光定量PCR验证差异表达基因 | 第61-63页 |
| ·电泳迁移率实验 | 第63-65页 |
| 5.讨论 | 第65-71页 |
| ·CodY转录调节因子选择 | 第65页 |
| ·突变株构建策略的选择 | 第65-66页 |
| ·小鼠组织带菌量结果分析 | 第66页 |
| ·基因芯片结果分析 | 第66-68页 |
| ·电泳迁移实验结果分析 | 第68页 |
| ·CodY转录调节因子对SS2毒力调控的探讨 | 第68-69页 |
| ·后续工作展望 | 第69-71页 |
| 6.结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77页 |