| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 插图和附表清单 | 第13-15页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-35页 |
| ·醇氧化酶概述 | 第16-17页 |
| ·微生物醇氧化酶的生化特性 | 第16页 |
| ·微生物醇氧化酶基因的表达调控 | 第16-17页 |
| ·高等植物的C1代谢网络 | 第17-23页 |
| ·叶酸介导的一碳(C1)代谢 | 第19-21页 |
| ·丝氨酸与甘氨酸的相互转化 | 第19-21页 |
| ·甲酸的活化作用及C1取代型叶酸的相互转换. | 第21页 |
| ·不依赖于叶酸的C1反应 | 第21-23页 |
| ·甲醇、甲醛、甲酸的代谢 | 第22-23页 |
| ·乙醛酸的合成 | 第23页 |
| ·植物体内CH_3OH的产生与释放 | 第23-24页 |
| ·植物对甲醇的吸收及甲醇对植物生长的影响 | 第24-28页 |
| ·植物对甲醇的吸收 | 第24-25页 |
| ·甲醇对低等植物生长的影响 | 第25页 |
| ·甲醇对模式植物生长的影响 | 第25-26页 |
| ·甲醇对农作物生长的影响 | 第26-28页 |
| ·微生物的CH_3OH代谢途径的研究进展 | 第28-31页 |
| ·高等植物CH_3OH代谢的研究进展 | 第31-32页 |
| ·提高植物HCHO代谢能力的遗传工程研究进展 | 第32-33页 |
| ·本研究的主要内容及意义 | 第33-35页 |
| 第二章 假丝酵母中AOD1基因的原核表达及重组蛋白的纯化 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌种和质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要培养基 | 第35-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第37页 |
| ·引物合成 | 第37页 |
| ·PCR方法 | 第37-38页 |
| ·DNA片段的胶回收 | 第38页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第38页 |
| ·表达载体连接反应体系 | 第38-39页 |
| ·质粒提取方法 | 第39页 |
| ·总蛋白的定量 | 第39页 |
| ·蛋白表达条件的优化及蛋白纯化方法 | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-44页 |
| ·TA克隆载体pMD18-T-AOD1的构建策略及其检测.. | 第40-42页 |
| ·pET32a(+)-AOD1原核表达载体的构建策略及其检测 | 第42-44页 |
| ·AOD1重组蛋白的表达及表达条件的优化 | 第44-45页 |
| ·AOD1重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 AOD1植物表达载体构建及过量表达HPS/PHI和AOD1转基因烟草的产生 | 第48-66页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·质粒与菌种 | 第49-50页 |
| ·转基因植物材料 | 第50页 |
| ·常用植物培养基配方 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·电击转化感受态农杆菌细胞 | 第52页 |
| ·菌落PCR方法 | 第52页 |
| ·植物遗传转化(农杆菌侵染转化烟草) | 第52-53页 |
| ·CTAB法提取植物基因组 | 第53页 |
| ·Trizol提取法提取植物总RNA | 第53页 |
| ·植物总蛋白的提取 | 第53页 |
| ·Western Blotting分析 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-64页 |
| ·植物表达载体pH2-35S-PrbcS-*T-AOD1的构建 | 第55-59页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第55-56页 |
| ·pMD18-T-AOD1植物TA克隆载体的构建及其检测 | 第56-57页 |
| ·入门克隆载体pENTR*-PrbcS-*T-AODl的构建 | 第57-58页 |
| ·LR反应获得植物表达载体 | 第58-59页 |
| ·烟草的转染及转基因烟草的检测 | 第59-64页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第59-60页 |
| ·表达rmpAB融合蛋白的转基因烟草的检测 | 第60-61页 |
| ·表达AOD1蛋白的转基因烟草的检测 | 第61-62页 |
| ·同时表达AOD1蛋白和rmpAB蛋白的转基因烟草的检测 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 转基因烟草代谢甲醇能力的检测及其应答甲醇刺激的生理生化特性变化分析 | 第66-91页 |
| ·材料与方法 | 第66-70页 |
| ·烟草材料的培养 | 第67页 |
| ·不同浓度外源性甲醇的施用对烟草生长及生根影响的检测 | 第67页 |
| ·不同浓度外源性甲醇的施用对烟草生理生化特性影响的检测 | 第67-70页 |
| ·可溶性总糖和总蛋白质含量的测定 | 第67-68页 |
| ·丙二醛(MDA)、H_2O_2及羰基化蛋白质(PC)含量的测定 | 第68-69页 |
| ·花青素含量的测定 | 第69页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第69-70页 |
| ·~(13)C甲醇标记试验 | 第70页 |
| ·~(13)C-NMR分析 | 第70页 |
| ·NMR样品的制备 | 第70页 |
| ·~(13)C-NMR数据的采集 | 第70页 |
| ·实验数据的统计分析 | 第70页 |
| ·结果分析 | 第70-84页 |
| ·不同浓度甲醇处理对各种转基因烟草和野生型烟草生长表型、生物量积累及其生理生化特性的影响 | 第70-77页 |
| ·不同浓度甲醇处理对各种转基因烟草和野生型烟草生长表型、生物量积累的影响 | 第71-73页 |
| ·不同浓度甲醇处理对三种转基因烟草和野生型烟草生理生化特性的影响 | 第73-76页 |
| ·不同浓度甲醇处理对转基因烟草和野生型烟草花青素和叶绿素的影响 | 第76-77页 |
| ·含有2mM ~(13)CH_3OH的固体培养条件下烟草的代谢谱分析 | 第77-81页 |
| ·含有6mM ~(13)CH_3OH的固体培养条件下烟草的代谢谱分析 | 第81-84页 |
| ·讨论 | 第84-91页 |
| 第五章 总结与展望 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第106-107页 |
