| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-16页 |
| 1.1 苹果酸的简介和生产 | 第11-12页 |
| 1.2 苹果酸生产思路 | 第12-13页 |
| 1.3 德氏乳杆菌生产苹果酸 | 第13-16页 |
| 1.3.1 核心发酵原料分析 | 第14页 |
| 1.3.2 德氏乳杆菌简介 | 第14-16页 |
| 第2章 苹果酸和生物法生产苹果酸的研究进展 | 第16-23页 |
| 2.1 苹果酸概述 | 第16页 |
| 2.2 苹果酸及其衍生物的应用 | 第16-19页 |
| 2.2.1 苹果酸在食品行业应用 | 第16-17页 |
| 2.2.2 苹果酸在医药行业应用 | 第17-18页 |
| 2.2.3 苹果酸在日化行业应用 | 第18页 |
| 2.2.4 苹果酸在保健行业应用 | 第18-19页 |
| 2.3 苹果酸生产方法介绍 | 第19-23页 |
| 2.3.1 苹果酸生产方法简介 | 第19页 |
| 2.3.2 生物法生产苹果酸发展过程 | 第19-21页 |
| 2.3.3 对于苹果酸新型生产方式的思考 | 第21-23页 |
| 第3章 苹果酸酶突变体的重组 | 第23-50页 |
| 3.1 实验材料及设备 | 第23-26页 |
| 3.1.1 菌种 | 第23页 |
| 3.1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 3.1.3 仪器 | 第24-25页 |
| 3.1.4 培养基 | 第25页 |
| 3.1.5 质粒 | 第25-26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-43页 |
| 3.2.1 从大肠杆菌K-12 中提取基因组 | 第26-27页 |
| 3.2.2 获得苹果酸酶（SM-NAD）表达基因目的片段 | 第27-29页 |
| 3.2.3 重叠延伸法对表达苹果酸酶（SM-NAD）的目的片段进行定点突变 | 第29-31页 |
| 3.2.4 突变苹果酸酶（SM-NAD-Y104Q）表达菌株的构建 | 第31-36页 |
| 3.2.5 突变苹果酸酶（SM-NAD-Y104Q）蛋白的分离纯化 | 第36-37页 |
| 3.2.6 突变苹果酸酶（SM-NAD-Y104Q）的活力测定 | 第37-38页 |
| 3.2.7 德氏乳杆菌所需表达苹果酸酶的质粒构建 | 第38-42页 |
| 3.2.8 德氏乳杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第43-49页 |
| 3.3.1 苹果酸酶（SM-NAD）表达基因的定点突变 | 第43-44页 |
| 3.3.2 苹果酸酶突变体的重组 | 第44-45页 |
| 3.3.3 苹果酸酶突变体表达蛋白分析 | 第45-46页 |
| 3.3.4 突变苹果酸酶（SM-NAD-Y104Q）的活力测定 | 第46-47页 |
| 3.3.5 乳酸杆菌所需表达苹果酸酶的质粒构建 | 第47-48页 |
| 3.3.6 表达苹果酸酶的德氏乳杆菌的构建 | 第48-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 第4章 德氏乳杆菌苹果酸的发酵特性 | 第50-60页 |
| 4.1 实验材料及设备 | 第50-52页 |
| 4.1.1 菌种 | 第50页 |
| 4.1.2 试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.3 仪器 | 第51页 |
| 4.1.4 培养基 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 发酵培养基中乳酸定量方法 | 第52页 |
| 4.2.2 碳源对发酵的影响 | 第52页 |
| 4.2.3 糖浓度对发酵的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.4 不同来源碳酸钙中和效果 | 第53页 |
| 4.2.5 接种量对发酵的影响 | 第53页 |
| 4.2.6 不同摇瓶装液量对发酵的影响 | 第53页 |
| 4.2.7 摇床转速对产酸的影响 | 第53页 |
| 4.2.8 温度对产发酵的影响 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-59页 |
| 4.3.1 碳源对发酵的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.2 糖浓度对发酵的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 不同来源碳酸钙中和效果 | 第56-57页 |
| 4.3.4 接种量对发酵的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.5 不同摇瓶装液量对发酵的影响 | 第58页 |
| 4.3.6 摇床转速对产酸的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.7 温度对产酸的影响 | 第59页 |
| 4.4 小结 | 第59-60页 |
| 第5章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录A 质粒图谱 | 第64-65页 |
| 附录B 氨基酸序列与基因序列 | 第65-69页 |
| 作者简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
