| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| ·引言 | 第17-22页 |
| ·蛋白质相互作用的生物学意义 | 第17-18页 |
| ·节点蛋白是研究蛋白质相互作用网络的有效突破点 | 第18页 |
| ·绝大多数蛋白质相互作用由相互作用结构域介导 | 第18-20页 |
| ·节点蛋白的结构域是研究相互作用网络的一个有价值的入手点 | 第20页 |
| ·PDZ结构域是最重要的蛋白质相互作用结构域之一 | 第20-22页 |
| ·本论文的研究内容 | 第22页 |
| ·本研究的创新和意义 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-25页 |
| 第二章 酵母双杂交筛选随机多肽文库研究ZO-1 PDZ3结构域的结合特性 | 第25-54页 |
| ·前言 | 第25-31页 |
| ·研究对象——ZO-1蛋白的PDZ3结构域 | 第25-27页 |
| ·研究方法——酵母双杂交筛选新型随机多肽文库 | 第27-31页 |
| 1、酵母双杂交系统简介 | 第27-30页 |
| 2、新型随机多肽文库简介 | 第30页 |
| 3、酵母双杂交筛选新型随机多肽文库的方法适用于研究PDZ结构域的结合特性 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| ·材料与方法 | 第32-35页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·实验结果 | 第35-43页 |
| ·酵母双杂交筛选随机多肽文库分离ZO-1 PDZ3的结合克隆 | 第35-36页 |
| ·ZO-1 PDZ3结构域的结合特性分析 | 第36-41页 |
| ·新配体蛋白的预测和验证 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-51页 |
| ·酵母双杂交筛选新型随机多肽文库的方法是全面研究PDZ结构域结合特性的理想选择 | 第43-46页 |
| ·筛选随机多肽文库在蛋白质组学水平上研究PDZ结构域的局限性 | 第46-47页 |
| ·ZO-1 PDZ3结构域的结合特性分析 | 第47-49页 |
| ·新发现相互作用的分析 | 第49-51页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第三章 高效研究多肽结合结构域结合特性的新策略 | 第54-98页 |
| 第一节 高效研究多肽结合结构域结合特性新策略的建立——PDZ结构域高效验证筛选体系的建立 | 第54-85页 |
| 3-1.1 前言 | 第54-58页 |
| 3-1.1.1 节点蛋白的结构域是研究蛋白质相互作用网络的有价值的入手点 | 第54-55页 |
| 3-1.1.2 在蛋白质组学水平上规模化研究结构域的结合特性必须大幅提高现有研究方法的效率 | 第55-56页 |
| 3-1.1.3 验证性筛选目的结构域配体库可提高效率,适应于规模化研究 | 第56-57页 |
| 3-1.1.4 验证性筛选目的结构域配体库的新策略用于研究PDZ结构域的结合特性 | 第57-58页 |
| 3-1.2 材料与方法 | 第58-61页 |
| 3-1.2.1 实验材料 | 第58页 |
| 3-1.2.2 实验方法 | 第58-61页 |
| 3-1.3 实验结果 | 第61-75页 |
| 3-1.3.1 高效研究多肽结合结构域结合特性的新策略 | 第61-63页 |
| 3-1.3.2 应用高效的验证性筛选策略快速研究PDZ结构域的结合特性 | 第63-75页 |
| 1、PDZ结构域配体文库的建立 | 第63-65页 |
| 2、验证筛选PDZ配体库 | 第65-67页 |
| 3、新配体蛋白的预测和验证 | 第67-68页 |
| 4、验证筛选体系的新一轮循环 | 第68-70页 |
| 5、新发现相互作用的分析 | 第70-75页 |
| 3-1.4 讨论 | 第75-81页 |
| 3-1.4.1 验证筛选体系的可持续发展性和高效性 | 第75-78页 |
| 3-1.4.2 结果的可信性分析 | 第78页 |
| 3-1.4.3 PDZ结构域的结合特性分析 | 第78-80页 |
| 3-1.4.4 验证筛选研究策略适用于其它多肽结合结构域结合特性的研究 | 第80-81页 |
| 3-1.5 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
| 第二节 PDZ结构域高效验证筛选体系的应用和发展 | 第85-97页 |
| 3-2.1 前言 | 第85-88页 |
| 3-2.1.1 PDZ结构域高效验证筛选体系通过应用得到发展 | 第85-86页 |
| 3-2.1.2 新的PDZ结构域研究对象——MAGI3蛋白的PDZ结构域 | 第86-88页 |
| 3-2.2 技术路线 | 第88-89页 |
| 3-2.3 材料和方法 | 第89-90页 |
| 3-2.3.1 实验材料 | 第89页 |
| 3-2.3.2 实验方法 | 第89-90页 |
| 3-2.4 实验结果 | 第90-95页 |
| 3-2.4.1 MAGI3 PDZ4结构域筛选随机多肽文库获得阳性克隆 | 第90页 |
| 3-2.4.2 MAGI3 PDZ4结构域的结合特性分析 | 第90-91页 |
| 3-2.4.3 PDZ配体库的发展 | 第91-95页 |
| 3-2.5 讨论 | 第95-96页 |
| 3-2.5.1 验证筛选提高发现新蛋白相互作用的效率 | 第95页 |
| 3-2.5.2 MAGI3 PDZ4结构域的结合特性分析 | 第95页 |
| 3-2.5.3 PDZ配体库的发展 | 第95-96页 |
| 3-2.6 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-98页 |
| 第四章 LNX蛋白家族PDZ结构域结合特性的研究 | 第98-131页 |
| ·前言 | 第98-103页 |
| ·泛素蛋白酶体系统 | 第98-99页 |
| ·LNX蛋白家族 | 第99-100页 |
| ·LNX蛋白的PDZ结构域 | 第100-102页 |
| ·用验证筛选体系系统地研究LNX家族PDZ结构域的结合特性 | 第102-103页 |
| ·技术路线 | 第103-104页 |
| ·材料和方法 | 第104-105页 |
| ·实验材料 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-105页 |
| ·实验结果 | 第105-122页 |
| ·诱饵蛋白的自激活检测 | 第105页 |
| ·应用高效验证筛选体系研究LNX家族PDZ结构域的结合特性 | 第105-122页 |
| 1、LNX1 PDZ1结构域的结合特性研究 | 第105-108页 |
| 2、LNX1 PDZ2结构域的结合特性研究 | 第108页 |
| 3、LNX1 PDZ3结构域的结合特性研究 | 第108-110页 |
| 4、LNX1 PDZ4结构域的结合特性研究 | 第110页 |
| 5、LNX2 PDZ1结构域的结合特性研究 | 第110-113页 |
| 6、LNX2 PDZ2结构域的结合特性研究 | 第113-115页 |
| 7、LNX2 PDZ3结构域的结合特性研究 | 第115-116页 |
| 8、LNX2 PDZ4结构域的结合特性研究 | 第116-117页 |
| 9、LNX4 PDZ结构域的结合特性研究 | 第117-120页 |
| 10、LNX家族PDZ-PDZ相互作用的研究 | 第120-121页 |
| 11、验证筛选体系的发展 | 第121-122页 |
| ·讨论 | 第122-128页 |
| ·LNX家族PDZ结构域的结合特性分析 | 第122-125页 |
| 1、识别C末端序列的PDZ结构域的结合特性分析 | 第122-123页 |
| 2、筛选获得的阳性配体C末端没有明显规律的原因分析 | 第123-124页 |
| 3、筛选未得到阳性配体的原因分析 | 第124页 |
| 4、LNX家族PDZ结构域之间相互作用分析 | 第124-125页 |
| ·验证筛选体系的发展和进一步论证 | 第125-126页 |
| ·LNX PDZ结构域功能的探讨和研究 | 第126-128页 |
| ·结论 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-131页 |
| 第五章 Liddle综合症分子治疗的初步探索 | 第131-143页 |
| ·前言 | 第131-134页 |
| ·Liddle综合症的临床特征 | 第131页 |
| ·Liddle综合症的发病机制 | 第131-133页 |
| ·Liddle综合症现在常规的临床治疗方法 | 第133页 |
| ·根治Liddle综合症需要在分子水平进行探索 | 第133-134页 |
| ·实验方法 | 第134-135页 |
| ·PY模体和PY突变体质粒的构建 | 第134页 |
| ·酵母双杂交筛选随机多肽文库 | 第134-135页 |
| ·实验结果 | 第135-139页 |
| ·Liddle综合症分子治疗的设想 | 第135-136页 |
| ·Liddle综合症分子治疗设想的实现 | 第136-139页 |
| ·讨论 | 第139-140页 |
| ·此设想只是针对于一种Liddle综合症突变型的分子治疗 | 第139页 |
| ·酵母双杂交筛选随机多肽文库获得PY突变体结合肽段的风险性 | 第139页 |
| ·后期研究的展望 | 第139-140页 |
| ·结论 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-143页 |
| 文献综述 PICK1:一个功能多样的药靶蛋白 | 第143-160页 |
| 附录一 实验结果的补充材料 | 第160-168页 |
| 附录二 常规实验材料与方法 | 第168-185页 |
| 附录三 PDZ结构域结合配体序列索引 | 第185-186页 |
| 附录四 缩略词表 | 第186-187页 |
| 个人简历 | 第187-188页 |
| 在读期间学术成果 | 第188-190页 |
| 致谢 | 第190-191页 |
| 在读期间发表的代表性文章 | 第191-221页 |
