| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-26页 |
| AD的发病机制 | 第11-14页 |
| 1. 基因突变 | 第11-12页 |
| 2. Aβ淀粉样肽假说 | 第12-13页 |
| 3. Tau蛋白假说 | 第13页 |
| 4. 胆固醇代谢异常 | 第13-14页 |
| 5. 氧化应激 | 第14页 |
| MicroRNA | 第14-17页 |
| 1. miRNA的基因定位及表达调控 | 第15页 |
| 2. miRNA的生物合成 | 第15-16页 |
| 3. miRNA靶基因的鉴定 | 第16-17页 |
| 4. miRNA研究新进展 | 第17页 |
| miRNA与神经系统 | 第17-19页 |
| 1. miRNA在神经系统中的表达 | 第17-18页 |
| 2. miRNA和神经系统的分化发育 | 第18页 |
| 3. miRNA和脑的生理功能 | 第18-19页 |
| mciorRNA与AD | 第19-22页 |
| 1. AD患者脑内miRNA表达谱的改变 | 第20-21页 |
| 2. miRNA调控AD致病基因的表达 | 第21-22页 |
| APP蛋白家族 | 第22-24页 |
| 展望 | 第24-26页 |
| 第一部分 microRNA在阿尔茨海默病中的作用研究 | 第26-75页 |
| 一. 材判 | 第26-29页 |
| 1. 实验动物 | 第26页 |
| 2. 主要生化试剂 | 第26-27页 |
| 3. 主要溶液配置 | 第27-29页 |
| 4. 主要仪器设备 | 第29页 |
| 二. 实验方法 | 第29-50页 |
| 1 APPswe/PS△E9转基因小鼠模型的制备和鉴定 | 第29-31页 |
| 2. MicroRNA芯片 | 第31页 |
| 3. Real-Time Reverse Transcriptase (RT) PCR | 第31-34页 |
| 4. miR-153表达载体的制备 | 第34-38页 |
| 5. miR-153稳转细胞系的建立和鉴定 | 第38-39页 |
| 6. 瞬时共转染 | 第39页 |
| 7. 氧化应激及Aβ肽毒性损伤细胞模型的制作 | 第39-40页 |
| 8. miR-153稳转细胞系增殖活性的检测 | 第40页 |
| 9. miR-153稳转细胞系凋亡水平的检测 | 第40-41页 |
| 10. miR-153靶基因的预测 | 第41页 |
| 11. APP-3’UTR、APLP2-3’UTR荧光素酶报告载体的构建 | 第41-45页 |
| 12. 荧光素酶活性检测实验 | 第45-46页 |
| 13. 免疫印迹(Western blot) | 第46-49页 |
| 14. 统计学分析 | 第49-50页 |
| 三.结果 | 第50-66页 |
| 1. APPswe/PSΔE9转基因鼠鼠尾鉴定结果 | 第50页 |
| 2. microRNA芯片检测结果 | 第50-51页 |
| 3. 组织及细胞RNA质量的鉴定 | 第51页 |
| 4. Real-time PCR检测AD小鼠脑组织中miR-153的表达 | 第51-52页 |
| 5. miR-153靶基因的预测 | 第52-54页 |
| 6. miR-153与靶基因3’UTR区的相互作用 | 第54-55页 |
| 7. APPswe/PSΔE9转基因小鼠脑内APP、APLP2的表达 | 第55-57页 |
| 8. miR-153对APP和APLP2表达水平的调控作用 | 第57-62页 |
| 9. Aβ42肽和H_2O_2对miR-153表达水平的影响 | 第62-63页 |
| 10. 高表达miR-153对下游信号分子的影响 | 第63-66页 |
| 四.讨论 | 第66-75页 |
| 1. miRNAs与AD发病机制的研究现状 | 第66-68页 |
| 2. APPswe/PSAE9双转基因鼠脑内miR-153的异常表达 | 第68-69页 |
| 3. miR-153靶基因的预测及鉴定 | 第69-70页 |
| 4. APP蛋白家族与AD | 第70-71页 |
| 5. miRNAs的表达调控 | 第71-73页 |
| 6. miR-153对靶基因下游信号分子的影响 | 第73-75页 |
| 第二部分 miR-153转基因小鼠的建立和分析 | 第75-85页 |
| 一.实验方法 | 第75-78页 |
| 1. miR-153转基因小鼠的制备 | 第75-77页 |
| 2. 转基因阳性鼠基因型的PCR鼠尾鉴定 | 第77-78页 |
| 3. Real-time PCR检测转基因鼠miR-153的表达 | 第78页 |
| 4. Western-blot检测miR-153靶基因的表达 | 第78页 |
| 二.结果 | 第78-83页 |
| 1. PCR鼠尾鉴定miR-153转基因小鼠 | 第78页 |
| 2. Real-time PCR检测转基因鼠miR-153的表达水平 | 第78-79页 |
| 3. 转基因鼠脑内miR-153靶蛋白表达水平的检测 | 第79-81页 |
| 4. 脑生理发育过程中miR-153与APP、APLP2的共表达 | 第81-83页 |
| 三.讨论 | 第83-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 附录 | 第98-107页 |
| 缩写表 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
