| 英文缩略词表 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一部分 检测mag-1 在高低转移肿瘤细胞表达水平及其细胞定位 | 第16-29页 |
| 一、模型细胞株转移能力及mag-1 在高低转移肿瘤细胞株表达水平检测 | 第16-24页 |
| 实验材料 | 第16-18页 |
| 实验方法 | 第18-21页 |
| 结果 | 第21-24页 |
| 1、转移标志蛋白Id-1 在PLA801C、PLA801D 中的差异表达 | 第21-22页 |
| 2、PLA801C 与 PLA801D 迁移能力的不同 | 第22页 |
| 3、mag-1 mRNA 在 PLA801C、PLA801D 中差异表达 | 第22-23页 |
| 4、mag-1 蛋白产物在 PLA801C、PLA801D 中表达差异 | 第23页 |
| 5、mag-1 在其他高低转移肿瘤细胞的表达水平 | 第23-24页 |
| 二、mag-1 在细胞中的定位 | 第24-29页 |
| 实验材料 | 第24页 |
| 实验方法 | 第24-25页 |
| 结果 | 第25-26页 |
| 讨论 | 第26-29页 |
| 第二部分 稳定转染细胞株的建立及mag-1 生物学功能的研究 | 第29-43页 |
| 一、稳定转染mag-1 细胞株的建立 | 第29-34页 |
| 实验材料 | 第29-30页 |
| 实验方法 | 第30-31页 |
| 结果 | 第31-34页 |
| 1、瞬时转染mag-1 正反义表达载体对mag-1 表达水平的影响 | 第31-32页 |
| 2、稳定转染mag-1 细胞克隆的筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| 3、稳定转染细胞株 mag-1 的 mRNA 表达水平检测 | 第33-34页 |
| 4、稳定转染细胞株中 mag-1 的蛋白表达水平检测 | 第34页 |
| 二、mag-1 生物学功能的研究 | 第34-43页 |
| 实验材料 | 第34页 |
| 实验方法 | 第34-36页 |
| 结果 | 第36-39页 |
| 1、过表达mag-1 对细胞形态的影响 | 第36-37页 |
| 2、过表达mag-1 对细胞增殖的影响 | 第37页 |
| 3、过表达mag-1 对细胞迁移能力的影响 | 第37-38页 |
| 4、过表达mag-1 对细胞粘附能力的影响 | 第38-39页 |
| 5、过表达mag-1 对细胞侵袭能力的影响 | 第39页 |
| 讨论 | 第39-43页 |
| 第三部分 利用RNAi 进一步研究mag-1 与肿瘤转移的关系 | 第43-56页 |
| 一、siRNA 表达载体的构建 | 第43-50页 |
| 实验材料 | 第43-44页 |
| 实验方法 | 第44-47页 |
| 结果 | 第47-50页 |
| 1、RNAi 载体的扩增 | 第47页 |
| 2、 RNAi 载体的双酶切及胶回收 | 第47-48页 |
| 3、构建的siRNA 表达载体的PCR 鉴定结果 | 第48页 |
| 4、构建的siRNA 表达载体的测序结果 | 第48-50页 |
| 二、检测干涉载体对mag-1 的干涉效果及稳定转染细胞株的获取 | 第50-52页 |
| 实验材料 | 第50页 |
| 实验方法 | 第50页 |
| 结果 | 第50-52页 |
| 1、瞬时转染干涉载体对mag-1 的干涉效果 | 第50-51页 |
| 2、G418 抗性细胞克隆 mag-1 表达水平的检测 | 第51页 |
| 3、G418 抗性细胞克隆的进一步鉴定 | 第51-52页 |
| 三、细胞生物学实验 | 第52-56页 |
| 实验材料 | 第53页 |
| 实验方法 | 第53页 |
| 结果 | 第53-54页 |
| 1、干涉mag-1 的表达对细胞迁移能力的影响 | 第53页 |
| 2、干涉mag-1 的表达对细胞粘附能力的影响 | 第53-54页 |
| 3、干涉mag-1 的表达对细胞侵袭能力的影响 | 第54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 第四部分 mag-1 促进肿瘤细胞转移机制的初步探讨 | 第56-73页 |
| 一、过表达mag-1 对已知肿瘤转移相关分子表达水平的影响 | 第56-60页 |
| 实验材料 | 第56-57页 |
| 实验方法 | 第57页 |
| 结果 | 第57-60页 |
| 1、过表达mag-1 对PCNA、MMP-2 及nm23H1 的m RNA 表达水平的影响 | 第57-58页 |
| 2、过表达 mag-1 对 VEGF、MMP-2、MTA-1、Id-1 及 P53 蛋白表达水平的影响 | 第58-59页 |
| 3、过表达mag-1 对细胞内游离Ca2+水平的影响 | 第59-60页 |
| 二、mag-1 的进一步认识 | 第60-64页 |
| 三、mag-1 对mTOR 信号通路的影响 | 第64-67页 |
| 实验材料 | 第64页 |
| 实验方法 | 第64-65页 |
| 结果 | 第65-67页 |
| 1、过表达 mag-1 增强血清刺激后细胞内 mTOR 底物 S6K1 及 4EBP-1 磷酸化水平 | 第65页 |
| 2、过表达 mag-1 增强血清刺激后细胞外源 S6K1 磷酸化水平 | 第65-66页 |
| 3、干涉 mag-1 表达降低血清刺激后细胞内 S6K1 及 4EBP-1 磷酸化水平 | 第66-67页 |
| 四、Rapamycin 对过表达mag-1 肿瘤细胞的生物学功能的影响 | 第67-69页 |
| 实验材料 | 第67页 |
| 实验方法 | 第67页 |
| 结果 | 第67-69页 |
| 讨论 | 第69-73页 |
| 总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
