基因转染精原干细胞在受体微环境中的增殖与分化
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一部分 文献综述及本题意义 | 第10-31页 |
| 一、干细胞研究进展 | 第10-11页 |
| ·干细胞的定义及特征 | 第10页 |
| ·干细胞的分类 | 第10-11页 |
| 二、精原干细胞 | 第11-16页 |
| ·定义 | 第11页 |
| ·形态特征 | 第11页 |
| ·起源 | 第11-12页 |
| ·SSCs的增殖、分化及细胞周期 | 第12-13页 |
| ·SSCs与精子发生 | 第13页 |
| ·SSCs的生物学特性 | 第13-16页 |
| 三、精原干细胞移植技术研究进展 | 第16-29页 |
| ·精原干细胞移植研究简史 | 第16-19页 |
| ·精原干细胞移植技术 | 第19-25页 |
| ·精原干细胞移植技术的应用 | 第25-28页 |
| ·精原干细胞移植潜在的问题 | 第28-29页 |
| 四、本题的研究内容和意义 | 第29-30页 |
| 五、本实验技术路线特点 | 第30-31页 |
| 第二部分 实验材料和方法 | 第31-46页 |
| 一、转基因动物制备技术路线流程比较 | 第31-32页 |
| 二、实验材料 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·质粒 | 第33页 |
| ·实验试剂 | 第33-34页 |
| 三、实验方法与步骤 | 第34-46页 |
| ·质粒的准备 | 第34-37页 |
| ·操作针的准备 | 第37页 |
| ·供体睾丸细胞的分离 | 第37-38页 |
| ·精原干细胞的差速贴壁法分选 | 第38页 |
| ·精原干细胞的体外转染 | 第38-39页 |
| ·移植受体小鼠的准备 | 第39页 |
| ·睾丸细胞的移植 | 第39-40页 |
| ·睾丸细胞移植检测 | 第40-46页 |
| 第三部分 结果和分析 | 第46-57页 |
| 一、pmaxGFP质粒的提取和鉴定 | 第46-47页 |
| ·pmaxGFP质粒提取结果与分析 | 第46页 |
| ·pmaxGFP质粒酶切检测结果与分析 | 第46-47页 |
| 二、精原干细胞分离和贴壁分选 | 第47-48页 |
| ·睾丸细胞的分离结果与分析 | 第47页 |
| ·精原干细胞差速贴壁分选的结果与分析 | 第47-48页 |
| 三、精原干细胞的体外脂质体法转染的结果与分析 | 第48-49页 |
| 四、精原干细胞移植 | 第49-57页 |
| ·小鼠睾丸移植效果 | 第50页 |
| ·小鼠睾丸外观体积比较 | 第50-51页 |
| ·小鼠睾丸指数比较 | 第51-52页 |
| ·小鼠睾丸显微镜观察结果及分析 | 第52-53页 |
| ·PCR扩增GFP基因的结果及分析 | 第53-54页 |
| ·小鼠睾丸石蜡切片观察结果及分析 | 第54-57页 |
| 第四部分 讨论和分析 | 第57-65页 |
| 一、关于质粒状态和准确性的讨论 | 第57-58页 |
| 二、关于受体及供体动物的讨论 | 第58-60页 |
| 三、关于精原干细胞体外转染的讨论 | 第60-61页 |
| 四、关于精原干细胞移植的讨论 | 第61-65页 |
| 第五部分 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77页 |
