| 摘要 | 第1-3页 |
| Summary | 第3-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1 植物抗渗透胁迫的分子机制 | 第14-19页 |
| ·植物抗渗透胁迫的信号转导与调控 | 第14-17页 |
| ·依赖ABA 但不需要蛋白质合成的信号转导途径（Ⅰ） | 第15页 |
| ·依赖ABA 且需要蛋白质合成的信号转导途径（Ⅱ） | 第15-16页 |
| ·不依赖ABA 的信号转导途径（Ⅲ、Ⅳ） | 第16-17页 |
| ·抗渗透胁迫基因产物的种类 | 第17-19页 |
| ·功能蛋白 | 第17-18页 |
| ·调节蛋白 | 第18-19页 |
| 2 植物转录因子研究 | 第19-30页 |
| ·植物转录因子的特征与种类 | 第20-27页 |
| ·高等植物转录因子的功能结构域 | 第20-23页 |
| ·转录因子的作用机制 | 第23-24页 |
| ·转录因子的种类 | 第24-27页 |
| ·植物转录因子的研究方法 | 第27-30页 |
| ·植物转录因子基因的克隆 | 第27-29页 |
| ·植物转录因子功能分析方法 | 第29-30页 |
| 3 植物AP2/EREBP 转录因子家族的研究进展 | 第30-35页 |
| ·AP2/EREBP 转录因子家族的分类研究 | 第30页 |
| ·AP2/EREBP 转录因子家族的起源和进化 | 第30-31页 |
| ·AP2/EREBP 转录因子的功能 | 第31-33页 |
| ·参与植物生长发育 | 第31-32页 |
| ·参与生物胁迫应答 | 第32页 |
| ·参与非生物胁迫应答 | 第32-33页 |
| ·DREB 转录因子的研究进展 | 第33-35页 |
| 4 立题依据 | 第35-38页 |
| ·目的意义 | 第35-36页 |
| ·研究目标 | 第36-37页 |
| ·主要研究内容 | 第37-38页 |
| 第二章 胡杨DREB 转录因子基因的克隆及特性分析 | 第38-59页 |
| 1 材料和方法 | 第38-49页 |
| ·材料 | 第38-41页 |
| ·植物材料培养及胁迫处理 | 第38页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·载体 | 第38页 |
| ·酶与试剂 | 第38-39页 |
| ·其它试剂 | 第39页 |
| ·溶液 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-49页 |
| ·胡杨总RNA 的提取(热CTAB 法) | 第41页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第41-42页 |
| ·DREB 基因同源片段的克隆 | 第42-44页 |
| ·胡杨DREB 基因的3`cDNA 的克隆 | 第44-45页 |
| ·巢式PCR 扩增5`端cDNA | 第45-47页 |
| ·DREB 基因cDNA 全长扩增 | 第47-48页 |
| ·DNA 序列的扩增及分析 | 第48页 |
| ·DREB 基因在不同胁迫条件下的表达模式分析 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| ·DREB 基因同源片段的获得 | 第49-50页 |
| ·DREB 基因cDNA3`序列和5`序列的获得 | 第50-51页 |
| ·DREB 基因cDNA 全长序列的获得 | 第51页 |
| ·胡杨DREB 基因的生物信息学分析 | 第51-55页 |
| ·DREB 基因的序列特征分析及编码蛋白的结构功能预测 | 第51-54页 |
| ·DREB 蛋白的三维空间结构预测 | 第54页 |
| ·PeDREB2a和PeDREB2b蛋白与其它DREB2类蛋白的同源性比对及系统进化树分析 | 第54-55页 |
| ·胡杨 DREB2a 和 DREB2b 基因的基因组 DNA 结构分析 | 第55-56页 |
| ·DREB 基因在不同胁迫条件下的表达模式分析 | 第56-57页 |
| 3. 讨论 | 第57-59页 |
| ·利用同源克隆的方法分离克隆胡杨 DREB 转录因子基因 | 第57-58页 |
| ·PeDREB2a 和PeDREB2b 基因的全长序列分析 | 第58页 |
| ·胡杨 DREB 转录因子基因在不同胁迫条件下的表达模式分析 | 第58-59页 |
| 第三章 胡杨PeDREB2a 和PeDREB2b 转录因子转录激活功能的验证 | 第59-70页 |
| 1 前言 | 第59-60页 |
| 2 材料和方法 | 第60-65页 |
| ·菌株与质粒 | 第60页 |
| ·酵母培养基 | 第60-61页 |
| ·酵母表达系统中使用的溶液及缓冲液 | 第61-62页 |
| ·酵母表达 | 第62-65页 |
| ·引物的设计与合成 | 第62页 |
| ·在酵母中表达的效应质粒的构建 | 第62页 |
| ·效应质粒的转化及菌落PCR 鉴定 | 第62页 |
| ·效应质粒的小量提取(碱法) | 第62-63页 |
| ·效应质粒的酶切鉴定 | 第63页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第63-64页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性滤纸分析 | 第64页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性(β-Galactosidase activity)测定 | 第64-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-69页 |
| ·在酵母中融合表达的重组质粒的构建 | 第65-68页 |
| ·重组质粒pBD-PeDREB2a 和pBD-PeDREB2b 的构建 | 第65-66页 |
| ·重组质粒的菌落PCR 鉴定 | 第66页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第67-68页 |
| ·重组质粒的酵母转化 | 第68-69页 |
| ·转化酵母菌株的β-半乳糖苷酶活性检测 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 第四章 PeDREB2a 和 PeDREB2b 转录因子的亚细胞定位 | 第70-78页 |
| 1 前言 | 第70页 |
| 2 材料与方法 | 第70-74页 |
| ·材料 | 第70-72页 |
| ·试验材料 | 第70页 |
| ·载体与菌株 | 第70页 |
| ·培养基 | 第70-72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·引物设计与合成 | 第72页 |
| ·GFP 融合表达载体的构建 | 第72页 |
| ·重组质粒的转化及菌落PCR 鉴定 | 第72页 |
| ·重组质粒的小量提取(碱法)及酶切鉴定 | 第72页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第72-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-77页 |
| ·与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒的构建 | 第74-76页 |
| ·重组质粒p163-GFP-PeDREB2a 和p163-GFP-PeDREB2b 的构建 | 第74-75页 |
| ·重组质粒的菌落PCR 鉴定 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第76页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第76页 |
| ·重组质粒在洋葱表皮细胞中的瞬时表达 | 第76-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-78页 |
| 第五章 植物高效表达载体的构建及胡杨PeDREB2a和PeDREB2b基因在烟草中的相关功能验证 | 第78-95页 |
| 1. 前言 | 第78页 |
| 2. 材料与方法 | 第78-85页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·植物材料 | 第78页 |
| ·菌株及载体 | 第78-79页 |
| ·实验中所用试剂与药品 | 第79页 |
| ·培养基 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-85页 |
| ·引物设计与合成 | 第79-80页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第80页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第80-81页 |
| ·转基因烟草的筛选 | 第81-82页 |
| ·转基因烟草的耐胁迫分析 | 第82页 |
| ·转基因烟草在逆境条件下的生理生化指标测定 | 第82-85页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第85-92页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第85页 |
| ·表达载体pCAMBIA2301-PeDREB2a 和 pCAMBIA2301-PeDREB2b 的构建 | 第85页 |
| ·重组质粒的菌落PCR 鉴定 | 第85页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第85页 |
| ·含有表达载体的农杆菌PCR 检测 | 第85-88页 |
| ·转基因烟草的筛选和检测 | 第88-90页 |
| ·转基因烟草的DNA 水平检测 | 第88-89页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR 检测 | 第89-90页 |
| ·转基因烟草对非生物胁迫的耐受分析 | 第90-91页 |
| ·转基因烟草的抗旱性分析 | 第90页 |
| ·转基因烟草的耐盐性分析 | 第90-91页 |
| ·转基因烟草在逆境条件下的生理生化指标测定 | 第91-92页 |
| ·转基因烟草植株胞质总蛋白含量的测定 | 第91页 |
| ·转基因烟草植株脯氨酸含量的测定 | 第91-92页 |
| ·转基因烟草植株可溶性糖含量的测定 | 第92页 |
| 4. 讨论 | 第92-95页 |
| 第六章 主要结论及创新点 | 第95-96页 |
| ·主要结论 | 第95页 |
| ·创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 缩略词表 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简介 | 第106-107页 |
| 导师简介 | 第107-108页 |
