| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| ·β-甘露聚糖酶的简介 | 第11-15页 |
| ·β-甘露聚糖酶的基因克隆 | 第15-17页 |
| ·β-甘露聚糖酶的基因表达 | 第17-19页 |
| ·β-甘露聚糖酶的应用及研究进展 | 第19-21页 |
| ·质谱技术及其在生命科学中的应用 | 第21-22页 |
| ·研究背景、思路和意义 | 第22-25页 |
| 2 实验设备及材料 | 第25-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌种 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·试剂与母液配制 | 第26-27页 |
| ·酶类 | 第27-28页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·其他 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-49页 |
| ·β-甘露聚糖酶的活力测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第30-31页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分离和纯化 | 第31-32页 |
| ·β-甘露聚糖酶的质谱分析 | 第32页 |
| ·总RNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-39页 |
| ·简并引物设计 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR步骤 | 第33-34页 |
| ·切胶回收PCR产物 | 第34-35页 |
| ·TA克隆 | 第35-37页 |
| ·测序 | 第37页 |
| ·RT-PCR条件摸索 | 第37-39页 |
| ·更换引物 | 第37页 |
| ·调整引物比例 | 第37-38页 |
| ·调整Mg2+浓度 | 第38-39页 |
| ·调整模板浓度 | 第39页 |
| ·退火温度摸索 | 第39页 |
| ·二次PCR及降落PCR | 第39页 |
| ·基因组DNA提取 | 第39-40页 |
| ·简并引物PCR | 第40-42页 |
| ·PCR步骤 | 第40-41页 |
| ·切胶回收PCR产物 | 第41页 |
| ·TA克隆 | 第41-42页 |
| ·测序 | 第42页 |
| ·SMART-5'RACE | 第42-45页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·5'RACE-Ready cDNA的制备 | 第42-43页 |
| ·5'RACE步骤 | 第43-44页 |
| ·巢式PCR | 第44-45页 |
| ·切胶回收5'RACE产物 | 第45页 |
| ·测序 | 第45页 |
| ·MART-3' RACE | 第45-47页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·3'RACE-Ready cDNA的制备 | 第45-46页 |
| ·3'RACE步骤 | 第46页 |
| ·切胶回收3'RACE产物 | 第46-47页 |
| ·TA克隆 | 第47页 |
| ·测序 | 第47页 |
| ·成熟肽PCR | 第47-48页 |
| ·拼接全长cDNA序列 | 第48页 |
| ·生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 4 实验结果 | 第49-85页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分离和纯化 | 第49-50页 |
| ·β-甘露聚糖酶的质谱分析 | 第50-51页 |
| ·总RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR | 第52-56页 |
| ·RT-PCR产物的电泳检测 | 第52页 |
| ·pT双酶切鉴定 | 第52页 |
| ·RT-PCR产物的测序结果 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR条件摸索 | 第53-56页 |
| ·RT-PCR产物的电泳检测 | 第54页 |
| ·pT1双酶切鉴定 | 第54页 |
| ·RT-PCR产物的测序结果 | 第54-56页 |
| ·基因组DNA提取的结果 | 第56页 |
| ·简并引物PCR | 第56-60页 |
| ·PCR产物的电泳检测 | 第56页 |
| ·pT双酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·PCR产物的测序结果 | 第57-60页 |
| ·SMART-5'RACE结果 | 第60-61页 |
| ·5'RACE产物的电泳检测 | 第60页 |
| ·pT双酶切鉴定 | 第60页 |
| ·PCR产物的测序结果 | 第60-61页 |
| ·SMART-3'RACE结果 | 第61-65页 |
| ·3'RACE产物的电泳检测 | 第61-62页 |
| ·pT双酶切鉴定 | 第62页 |
| ·3'RACE产物的测序结果 | 第62-65页 |
| ·成熟肽PCR结果 | 第65-67页 |
| ·拼接全长cDNA序列 | 第67-68页 |
| ·生物信息学分析 | 第68-85页 |
| ·开放阅读框分析 | 第68-72页 |
| ·同源性分析 | 第72-75页 |
| ·一级结构分析 | 第75-79页 |
| ·二级结构和功能分析 | 第79-83页 |
| ·三级结构分析 | 第83-85页 |
| 5 讨论 | 第85-90页 |
| ·利用肽段信息进行简并引物的设计 | 第85页 |
| ·RT-PCR条件的优化 | 第85-86页 |
| ·以基因组DNA为模板的简并PCR克隆新基因的尝试 | 第86页 |
| ·TAIL-PCR克隆新基因的5'和3'末端 | 第86-87页 |
| ·生物信息学分析 | 第87-90页 |
| 小结和展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 致谢 | 第97页 |