中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-12页 |
引言 | 第12-13页 |
1 文献综述 | 第13-23页 |
第一部分 高等植物中α-半乳糖苷酶的不同形式及其酶学性质 | 第13-17页 |
·高等植物中α-半乳糖苷酶与水苏糖卸出的关系 | 第13-14页 |
·α-半乳糖苷酶在高等植物中的不同形式和分布 | 第14-15页 |
·α-半乳糖苷酶在高等植物中的酶学性质 | 第15-16页 |
·研究展望 | 第16-17页 |
第二部分 昆虫杆状病毒表达载体系统及其应用研究进展 | 第17-23页 |
2 黄瓜酸性α-半乳糖苷酶昆虫杆状病毒表达载体的构建 | 第23-35页 |
·材料、试剂与方法 | 第23-28页 |
·材料 | 第23页 |
·试剂、载体 | 第23页 |
·方法 | 第23-28页 |
·结果与分析 | 第28-35页 |
·黄瓜幼叶总RNA 的提取 | 第28-29页 |
·RT-PCR反应扩增2种黄瓜酸性α-半乳糖苷酶编码区 | 第29页 |
·巢式PCR 验证回收的目的片段 | 第29-30页 |
·重组质粒的酶切验证分析 | 第30-31页 |
·重组质粒的PCR 验证分析 | 第31-32页 |
·序列测定结果与分析 | 第32-35页 |
3 黄瓜酸性α-半乳糖苷酶的离体表达 | 第35-42页 |
·试剂和技术路线 | 第35-36页 |
·试剂 | 第35页 |
·技术路线 | 第35-36页 |
·实验方法 | 第36-38页 |
·昆虫Sf9 细胞系培养 | 第36页 |
·表达载体的准备 | 第36页 |
·重组质粒的提取 | 第36页 |
·共转染 | 第36-37页 |
·扩增病毒产生高滴度病毒储液 | 第37页 |
·接种病毒,表达重组蛋白 | 第37页 |
·目的蛋白的收获 | 第37-38页 |
·目的蛋白的活性检测 | 第38页 |
·结果与分析 | 第38-42页 |
·昆虫sf9 细胞系培养 | 第38-39页 |
·表达载体的准备 | 第39页 |
·共转染 | 第39-40页 |
·目的蛋白的表达及活性检测 | 第40-42页 |
4 黄瓜酸性α-半乳糖苷酶的酶学性质研究 | 第42-50页 |
·试剂和方法 | 第42-43页 |
·试剂 | 第42页 |
·方法 | 第42-43页 |
·结果与分析 | 第43-50页 |
·最佳 pH 的确定 | 第43-45页 |
·最适反应温度的确定 | 第45-46页 |
·Km 值和Vm 值的测定 | 第46-48页 |
·D-半乳糖的抑制作用 | 第48-49页 |
·对棉籽糖和水苏糖的催化活性 | 第49-50页 |
5 结论与讨论 | 第50-52页 |
参考文献 | 第52-58页 |
致谢 | 第58-59页 |
攻读学位期间发表或待发表的学术论文目录 | 第59-60页 |