| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| ·微生物脂肪酶简介 | 第10-11页 |
| ·微生物脂肪酶的分子生物学研究进展 | 第11-16页 |
| ·细菌脂肪酶分子生物学研究概况 | 第11-13页 |
| ·真菌脂肪酶分子生物学研究概况 | 第13-15页 |
| ·微生物脂肪酶分子改造研究进展 | 第15-16页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| ·目的 | 第16页 |
| ·意义 | 第16-18页 |
| 第2章 脂肪酶产生菌Aspergillus sp.FS132 18S rRNA基因序列分析 | 第18-26页 |
| ·前言 | 第18页 |
| ·材料与方法 | 第18-22页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第18-19页 |
| ·试剂与载体 | 第19页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-22页 |
| ·菌丝体总DNA的提取 | 第19页 |
| ·感受态Ecoli.JM109制备 | 第19-20页 |
| ·Aspergillus sp.FS132 18S rRNA基因的获得 | 第20页 |
| ·目的基因的连接 | 第20页 |
| ·转化 | 第20页 |
| ·阳性克隆子筛选 | 第20-21页 |
| ·SDS碱裂解法抽提质粒 | 第21页 |
| ·测序 | 第21页 |
| ·18S rRNA序列分析和进化树构建 | 第21-22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-25页 |
| ·Aspergillus sp.FS132形态学观察 | 第22页 |
| ·Aspergillus sp.FS132 18S rRNA基因的获得 | 第22-23页 |
| ·阳性克隆子的筛选与验证 | 第23页 |
| ·18S rRNA基因序列及系统进化树分析 | 第23-25页 |
| ·小结 | 第25-26页 |
| 第3章 Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因组DNA(ATL-DNA)及cDNA(ATL-DNA)序列分析 | 第26-40页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-30页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·载体及工具酶 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132部分脂肪酶基因组DNA的获得 | 第27页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因组DNA(ATL-DNA)的获得 | 第27-28页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因组DNA的克隆及序列测定 | 第28-29页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶cDNA(ATL-cDNA)获得 | 第29页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶cDNA克隆及序列测定 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-39页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132部分脂肪酶基因的获得 | 第30页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因组DNA(ATL-DNA)的获得 | 第30页 |
| ·阳性克隆子的筛选与验证 | 第30-31页 |
| ·ATL-DNA测序结果 | 第31-34页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶cDNA克隆及序列测定 | 第34-39页 |
| ·菌丝体总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·阳性克隆子菌落PCR验证 | 第35-36页 |
| ·ATL-cDNA测序结果 | 第36-37页 |
| ·ATL-DNA与ATL-cDNA序列比对分析 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第4章 Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第40-54页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-45页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·载体与宿主菌 | 第40页 |
| ·工具酶 | 第40页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第40页 |
| ·Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因表达实验所用的溶液及培养基 | 第40-42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·pPIC 3.5K/ATL-cDNA重组质粒的线性化 | 第43-44页 |
| ·制备感受态甲醇毕赤酵母GS115 | 第44页 |
| ·重组质粒电击转化至感受态毕赤酵母 | 第44页 |
| ·重组酵母的筛选、鉴定及PCR验证 | 第44-45页 |
| ·酵母重组细胞的诱导表达 | 第45页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-52页 |
| ·pMD19-T/ATL-cDNA重组质粒、pBluescript ks(+)质粒的酶切 | 第45-46页 |
| ·PKS/ATL-cDNA重组质粒、pPIC 3.5K表达质粒的酶切 | 第46-48页 |
| ·重组质粒电转化至感受态毕赤酵母细胞 | 第48-49页 |
| ·重组酵母菌的平板筛选验证及PCR验证 | 第49-50页 |
| ·表达蛋白的活性检测 | 第50-52页 |
| ·三丁酸甘油脂验证板法检测酶活 | 第50-51页 |
| ·NaOH滴定法检测酶活 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 第5章 Aspergillus tamarii FS132产酶条件的初步优化 | 第54-58页 |
| ·材料与方法 | 第54页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·发酵培养基 | 第54页 |
| ·方法 | 第54页 |
| ·培养基初始pH对FS132产酶的影响 | 第54页 |
| ·空气量和培养温度试验 | 第54页 |
| ·发酵周期试验 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-56页 |
| ·培养基初始pH对FS132产酶的影响 | 第54-55页 |
| ·空气量和培养温度试验 | 第55-56页 |
| ·发酵周期试验 | 第56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 个人简历 | 第76-78页 |
