| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-36页 |
| ·植物与病原菌相互作用的机理研究 | 第12-19页 |
| ·植物病原细菌的致病因子及编码致病因子的致病基因 | 第12-15页 |
| ·胞外多糖 | 第13页 |
| ·脂多糖 | 第13-14页 |
| ·胞外酶 | 第14页 |
| ·植物毒素 | 第14-15页 |
| ·三型分泌的效应物 | 第15页 |
| ·病原菌的分泌系统 | 第15-19页 |
| ·Ⅰ型分泌系统 | 第16页 |
| ·Ⅱ型分泌系统 | 第16页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第16-18页 |
| ·Ⅳ型分泌系统 | 第18页 |
| ·Ⅴ型分泌系统 | 第18-19页 |
| ·十字花科黑腐病菌分子遗传学研究概况 | 第19-20页 |
| ·十字花科黑腐病菌特征及其分类现状 | 第19页 |
| ·Xcc遗传学研究概况 | 第19-20页 |
| ·hrp基因概述 | 第20-23页 |
| ·hrp基因簇组成及功能 | 第20-21页 |
| ·hrp基因簇的调控机理 | 第21-23页 |
| ·hrp致病岛—效应物蛋白运输的遗传学基础 | 第21-22页 |
| ·hrp基因的表达 | 第22-23页 |
| ·T3SS效应物概述 | 第23-32页 |
| ·效应物的特征 | 第23-25页 |
| ·T3SS的特征 | 第23-25页 |
| ·效应物的特征 | 第25页 |
| ·效应物的研究概况 | 第25-29页 |
| ·全基因组鉴定效应物系统研究方法概况 | 第29-31页 |
| ·avr基因的研究概况 | 第31-32页 |
| ·hpa基因研究概述 | 第32-35页 |
| ·hpa基因在Xcc 8004 hrp致病岛的基本分布及hpa基因研究概况 | 第32-33页 |
| ·hpa基因研究概况 | 第33-35页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| ·目的与内容 | 第35页 |
| ·研究意义 | 第35-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第36-40页 |
| ·培养基及培养条件 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌(E.coli) | 第40页 |
| ·黄单胞菌(Xcc) | 第40-41页 |
| ·菌种保藏 | 第41页 |
| ·常用抗生素 | 第41页 |
| ·常用溶液、缓冲液 | 第41-42页 |
| ·细菌核酸的制备 | 第42-44页 |
| ·细菌总DNA的提取 | 第42页 |
| ·质粒的提取(碱裂解法) | 第42-43页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·cDNA的合成 | 第44页 |
| ·细菌总蛋白的制备 | 第44-45页 |
| ·凝胶电泳 | 第45-46页 |
| ·Western印迹 | 第46-47页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第47-49页 |
| ·电击法转化大肠杆菌 | 第47-48页 |
| ·氯化钙法转化大肠杆菌 | 第48-49页 |
| ·DNA操作 | 第49页 |
| ·DNA片段的回收 | 第49页 |
| ·DNA的酶切和连接 | 第49页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第49-52页 |
| ·PCR引物的设计 | 第49-50页 |
| ·PCR反应 | 第50-52页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第52页 |
| ·DNA测序 | 第52-53页 |
| ·三亲本接合 | 第53页 |
| ·突变体营养缺陷型检测 | 第53页 |
| ·胞外酶的检测 | 第53-54页 |
| ·胞外蛋白酶的检测 | 第53-54页 |
| ·胞外淀粉酶的检测 | 第54页 |
| ·胞外纤维素酶的检测 | 第54页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第54页 |
| ·植物试验 | 第54-56页 |
| ·致病性试验 | 第54-55页 |
| ·过敏反应(HR)试验 | 第55-56页 |
| ·十字花科黑腐病菌过敏性反应检测 | 第55-56页 |
| ·细菌在培养基中的生长繁殖 | 第56页 |
| ·细菌在寄主中的生长繁殖 | 第56-57页 |
| ·整合突变体的构建 | 第57页 |
| ·整合突变体的构建 | 第57页 |
| ·整合突变体的验证 | 第57页 |
| ·突变体的反式功能互补 | 第57页 |
| ·候选效应物基因的表达构建 | 第57-58页 |
| ·目的基因启动子报道基因的构建 | 第58页 |
| ·候选基因的转运检测构建 | 第58页 |
| ·β-葡糖醛酸酶(GUS)活性平板检测 | 第58-59页 |
| 第三章 结果与分析 | 第59-86页 |
| ·报告质粒pLAG、pLJ-B、pJAG、pJJB的构建 | 第59-66页 |
| ·构建策略 | 第59-60页 |
| ·构建结果 | 第60-62页 |
| ·pLXG,pJXG的构建 | 第60-61页 |
| ·pLJB,pJJB,pLAG,pJAG的构建 | 第61-62页 |
| ·报告质粒的分子验证 | 第62-65页 |
| ·报告质粒效应物转运实验验证 | 第65-66页 |
| ·hpa基因功能的验证 | 第66-86页 |
| ·各hpa基因非极性整和突变体的构建和验证 | 第67-69页 |
| ·Xcc 8004各hpa基因在各病原菌间的分布(表3-1) | 第67页 |
| ·Xcc 8004基因组上目标基因的整合突变体的构建 | 第67页 |
| ·3001NK的构建 | 第67-68页 |
| ·3014NK的验证 | 第68页 |
| ·3022NK的验证 | 第68-69页 |
| ·影响致病性或过敏反应的hpa基因互补菌株的构建 | 第69-70页 |
| ·各hpa基因突变体及hrpF突变体的致病性上株结果 | 第70页 |
| ·各hpa基因突变体及互补株的致病性上株结果 | 第70-71页 |
| ·各hpa基因整合突变体及互补株的HR上株结果 | 第71-72页 |
| ·各hpa基因整合突变体及互补株的表型检测 | 第72-74页 |
| ·各hpa基因信号区融合pL6gus,检测其是否有独立的启动子 | 第74-77页 |
| ·RT-PCR进一步检测hpa基因是否hrpG,hrpX调控及Xcc 8004 hrp基因簇在不同培养基中的表达差异情况 | 第77-78页 |
| ·各hpa基因自身是效应物或分子伴侣 | 第78-81页 |
| ·已知效应物及hrpF导入各非效应物突变体后的HR结果 | 第81-86页 |
| 第四章 讨论 | 第86-101页 |
| ·关于hpa基因 | 第86-88页 |
| ·关于hpa1基因 | 第86页 |
| ·关于hpa2基因 | 第86-87页 |
| ·关于hpaB基因 | 第87页 |
| ·关于hpaP基因 | 第87页 |
| ·关于XC3024基因 | 第87页 |
| ·关于hpaA基因 | 第87-88页 |
| ·关于hpa基因表达条件的讨论 | 第88页 |
| ·关于效应物转运和分泌的鉴定系统 | 第88-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第102页 |
