| 第一部分 hsTRAIL蛋白的表达与复性研究 | 第1-30页 |
| 摘要 | 第6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-15页 |
| 1 TRAIL的结构和分布 | 第7-8页 |
| 2 TRAIL受体 | 第8-10页 |
| ·TRAILR1 | 第8-9页 |
| ·TRAILR2 | 第9页 |
| ·TRAILR3 | 第9页 |
| ·TRAILR4 | 第9页 |
| ·OPG | 第9-10页 |
| 3 TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制 | 第10-12页 |
| ·受体途径 | 第10页 |
| ·转录因子途径 | 第10-11页 |
| ·核受体途径 | 第11页 |
| ·线粒体与细胞凋亡 | 第11-12页 |
| 4 TRAIL在肿瘤治疗方面的价值 | 第12-14页 |
| ·TRAIL与多重抗药性 | 第13页 |
| ·TRAIL与传统放疗、化疗的协同作用 | 第13-14页 |
| 5 TRAIL作用的毒性反应 | 第14页 |
| 6 展望 | 第14-15页 |
| 实验研究 | 第15-30页 |
| 前言: | 第15页 |
| 1 实验材料 | 第15-16页 |
| ·菌种和质粒 | 第15页 |
| ·试剂和耗材 | 第15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-20页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第16-17页 |
| ·表达质粒的转化 | 第16页 |
| ·pET3c/hsTRAIL表达载体宿主菌的诱导表达 | 第16-17页 |
| ·表达产物分布的确定 | 第17页 |
| ·hsTRAIL包含体蛋白的漂洗纯化 | 第17页 |
| ·包含体的溶解与复性 | 第17-18页 |
| ·稀释复性: | 第17-18页 |
| ·透析复性: | 第18页 |
| ·复性hsTRAIL蛋白的浓缩 | 第18-19页 |
| ·复性hsTRAIL蛋白的凝胶过滤纯化 | 第19页 |
| ·复性hsTRAIL蛋白的生物学活性测定 | 第19-20页 |
| ·hsTRAIL蛋白对293细胞作用的观察 | 第19页 |
| ·MTT法测定hsTRAIL对Hela细胞的影响 | 第19-20页 |
| ·DNA-Ladder法测定hsTRAIL对细胞的影响 | 第20页 |
| 3 实验结果 | 第20-25页 |
| ·pET3c/hsTRAIL表达载体宿主菌的诱导表达 | 第20-21页 |
| ·TRAIL包涵体蛋白的分离、漂洗和纯化 | 第21-22页 |
| ·TRAIL包涵体的溶解与稀释复性 | 第22页 |
| ·复性hsTRAIL蛋白的凝胶过滤纯化 | 第22-23页 |
| ·复性hsTRAIL蛋白的生物学活性测定 | 第23-25页 |
| ·hsTRAIL蛋白对293细胞作用的观察 | 第23-24页 |
| ·MTT法测定hsTRAIL对Hela细胞的影响 | 第24页 |
| ·DNA-Ladder法测定hsTRAIL对Hela细胞的影响 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 5 参考文献: | 第26-30页 |
| 第二部分 重组枯草芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶的诱导表达与培养基优化 | 第30-67页 |
| 摘要 | 第30页 |
| Abstract | 第30-32页 |
| 前言 | 第32-45页 |
| 一 谷氨酰胺 | 第32-39页 |
| (一) L-谷氨酰胺的一般物化性质 | 第32页 |
| (二) 谷氨酰胺的代谢与生理功能 | 第32-33页 |
| (1) 谷氨酰胺的代谢 | 第32-33页 |
| (2) 谷氨酰胺的生理功能 | 第33页 |
| (三) 谷氨酰胺与免疫系统 | 第33-34页 |
| (四) L-谷氨酰胺的生产方法 | 第34-37页 |
| (1) 化学酰化法生成L-谷氨酰胺 | 第34-35页 |
| (2) 发酵法生成L-谷氨酰胺 | 第35-36页 |
| (3) 酶法生成L-谷氨酰胺 | 第36-37页 |
| (五) L-谷氨酰胺的生产概况 | 第37-38页 |
| (六) L-谷氨酰胺的前景展望 | 第38-39页 |
| 二 谷氨酰胺合成酶 | 第39-42页 |
| (一) 总述 | 第39-40页 |
| (二) 枯草芽胞杆菌GS | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 实验研究 | 第45-67页 |
| 第一章 乳糖诱导重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第45-56页 |
| 1 实验材料和方法 | 第45-48页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌种和质粒 | 第45页 |
| ·试剂和耗材 | 第45页 |
| ·主要实验仪器 | 第45页 |
| ·试剂配制 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·菌体生长及目的蛋白表达量的测定方法 | 第46页 |
| ·菌株最佳诱导起始生长量的确定 | 第46页 |
| ·最适诱导物浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·乳糖最佳诱导时间的研究 | 第47页 |
| ·补加乳糖和氨苄青霉素对目的蛋白表达量的影响 | 第47页 |
| ·不同培养基对目的蛋白表达的影响 | 第47页 |
| ·表达产物分布的确定 | 第47-48页 |
| ·表达产物活性的鉴定 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-53页 |
| ·菌株最佳诱导起始生长量的确定 | 第48-49页 |
| ·最适诱导物浓度的确定 | 第49页 |
| ·乳糖最佳诱导时间的研究 | 第49-51页 |
| ·补加乳糖和氨苄青霉素对目的蛋白表达量的影响 | 第51页 |
| ·不同培养基对目的蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| ·表达产物的分布 | 第52-53页 |
| ·表达产物的活性 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 4 参考文献 | 第54-56页 |
| 第二章 重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶蛋白在改良M9培养基中的诱导表达 | 第56-67页 |
| 1 材料和方法 | 第56-59页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·菌种和质粒 | 第56页 |
| ·试剂和耗材 | 第56页 |
| ·主要实验仪器 | 第56页 |
| ·试剂配制 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·菌体生长及目的蛋白表达量的测定方法 | 第57页 |
| ·菌株最佳本底培养基的确定 | 第57页 |
| ·最佳碳源的确定 | 第57页 |
| ·碳源最佳添加比例的确定 | 第57-58页 |
| ·碳源与诱导物浓度组合的确定 | 第58页 |
| ·不同温度对目的蛋白表达的影响 | 第58页 |
| ·表达产物分布的确定 | 第58页 |
| ·表达产物活性的鉴定 | 第58-59页 |
| 2 结果 | 第59-65页 |
| ·菌株最佳本底培养基的确定 | 第59-60页 |
| ·最佳碳源的确定 | 第60-61页 |
| ·碳源最佳添加比例的确定 | 第61-62页 |
| ·碳源与诱导物浓度组合的确定 | 第62-63页 |
| ·不同温度对目的蛋白表达的影响 | 第63-64页 |
| ·表达产物的分布 | 第64页 |
| ·表达产物的活性 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-66页 |
| 4 参考文献 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
