| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-28页 |
| ·基因治疗概述 | 第11-12页 |
| ·自杀基因概述 | 第12-14页 |
| ·CD基因的基本特征 | 第14-16页 |
| ·基因和蛋白质结构 | 第14-15页 |
| ·生化特性 | 第15-16页 |
| ·CD基因治疗肿瘤的机制 | 第16-20页 |
| ·直接杀伤 | 第16页 |
| ·旁观者效应 | 第16-19页 |
| ·简单扩散 | 第17页 |
| ·免疫反应 | 第17-18页 |
| ·缝隙连接 | 第18页 |
| ·细胞凋亡 | 第18-19页 |
| ·CD的基因治疗现状 | 第19-20页 |
| ·骨髓间充质干细胞 | 第20-22页 |
| ·骨髓间充质干细胞定义 | 第20-21页 |
| ·骨髓间充质干细胞的基础研究及生物学特性 | 第21-22页 |
| ·骨髓间充质干细胞在基因治疗中的优势及应用 | 第22-25页 |
| ·骨髓间充质干细胞作为基因治疗的载体细胞的优势 | 第22-25页 |
| ·骨髓间充质干细胞在基因治疗中的应用现状 | 第25页 |
| ·骨髓间充质干细胞在胶质瘤基因治疗中的应用及展望 | 第25-27页 |
| ·骨髓间充质干细胞在胶质瘤基因治疗中的应用 | 第25-26页 |
| ·存在问题与展望 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 2 大肠杆菌CD基因的克隆 | 第28-42页 |
| ·概述 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-32页 |
| ·实验质粒和宿主菌 | 第28页 |
| ·PCR引物和DNA测序 | 第28-29页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·实验药品及主要试剂 | 第30页 |
| ·实验试剂的配制 | 第30-32页 |
| ·实验方法 | 第32-37页 |
| ·CD基因的扩增 | 第32-35页 |
| ·大肠杆菌基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·CD特异性引物的设计与合成 | 第33页 |
| ·目的基因片段CD基因的合成 | 第33-34页 |
| ·CD基因PCR产物的回收与纯化 | 第34-35页 |
| ·PCR产物与pMD19-T克隆载体的连接 | 第35-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·pMD19-CD质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·阳性重组质粒鉴定 | 第37页 |
| ·CD基因的测序 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-41页 |
| ·CD基因的扩增 | 第37页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·CD基因测序结果 | 第38-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 3.pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒的构建 | 第42-48页 |
| ·概述 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验质粒和宿主菌 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验药品及试剂 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·ptRES2-AcGFP1质粒的扩增、提取与保存 | 第43页 |
| ·pIRES2-AcGFP1质粒转化E.coliDH5α | 第43页 |
| ·质粒的提取 | 第43页 |
| ·含pIRES2-AcGFP1质粒的菌种保存 | 第43页 |
| ·pIRES2-AcGFP1线性质粒的制备 | 第43-44页 |
| ·CD基因的制备 | 第44页 |
| ·CD基因片段与质粒pIRES2-AcGFP1的重组连接和转化 | 第44页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD阳性重组质粒的纯化 | 第45页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD阳性菌种的保存 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-46页 |
| ·pIRES2-AcGFP1质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD重组质粒的鉴定结果 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 4 pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体在骨髓间充质干细胞中表达 | 第48-59页 |
| ·概述 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第49-51页 |
| ·实验动物 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49-50页 |
| ·实验药品及试剂 | 第50页 |
| ·实验所需试剂及其配制 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·骨髓间充质干细胞的原代培养 | 第51-52页 |
| ·细胞传代 | 第52页 |
| ·骨髓间充质干细胞的冻存和复苏 | 第52-53页 |
| ·骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第53页 |
| ·向成骨细胞的诱导分化和鉴定 | 第53页 |
| ·向脂肪细胞的诱导分化和鉴定 | 第53页 |
| ·脂质体介导的细胞转染 | 第53-54页 |
| ·荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-58页 |
| ·骨髓间充质干细胞的原代及传代培养 | 第54-55页 |
| ·骨髓间充质干细胞的鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·基因转染与绿色荧光蛋白表达的观察 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
