| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 文献综述 | 第10-21页 |
| 第一章 新基因功能研究的策略与方法 | 第10-21页 |
| ·新基因的生物信息学分析 | 第10-14页 |
| ·核酸序列分析 | 第10-12页 |
| ·蛋白质结构与功能预测及方法 | 第12-14页 |
| ·新基因功能研究策略 | 第14-20页 |
| ·mRNA 水平的表达谱分析 | 第14-15页 |
| ·蛋白质水平的表达分析 | 第15-17页 |
| ·基因编码蛋白相互作用的研究 | 第17-18页 |
| ·差异表达基因的研究方法 | 第18-20页 |
| ·基因功能失活策略 | 第20-21页 |
| 试验研究 | 第21-61页 |
| 第二章 HCV p7 蛋白反式调节基因 p7TP2 的 克隆及生物信息学分析 | 第21-28页 |
| ·材料和方法 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-23页 |
| ·实验结果 | 第23-26页 |
| ·p7TP2 的全长编码序列的确定 | 第23-24页 |
| ·p7TP2 基因的PCR 扩增及序列鉴定 | 第24页 |
| ·pcDNA3.1/myc-HisA-p7TP2 载体构建 | 第24页 |
| ·p7TP2 基因生物信息学分析 | 第24-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 第三章 实时荧光定量 PCR 验证 HCV p7 下调 p7TP2 基因的表达 | 第28-32页 |
| ·材料与方法 | 第28-30页 |
| ·细胞、质粒及主要试剂 | 第28页 |
| ·细胞培养 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-30页 |
| ·结果 | 第30页 |
| ·实时荧光定量PCR 细胞转染及总RNA 提取 | 第30页 |
| ·熔解曲线分析 | 第30页 |
| ·实时荧光定量PCR 试验结果 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第四章 应用抑制性消减杂交技术筛选 p7TP2 反式调节基因 | 第32-37页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·细胞、质粒及主要试剂 | 第32页 |
| ·细胞转染及mRNA 提取 | 第32页 |
| ·消减杂交文库的建立 | 第32页 |
| ·消减文库扩增及克隆鉴定分析 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·提取细胞mRNA 的定性、定量分析 | 第33页 |
| ·dscDNA 两端连接效率检测 | 第33-34页 |
| ·cDNA 消减文库消减效率的鉴定 | 第34页 |
| ·差异表达cDNA 片断的扩增及克隆 | 第34-35页 |
| ·cDNA 测序与同源性分析初步结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第五章 HCV p7TP2 融合蛋白表达及多克隆抗体的制备及检测 | 第37-45页 |
| ·材料与方法 | 第37-39页 |
| ·材料与试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·大肠杆菌稀有密码子分析 | 第39页 |
| ·p7TP2 基因的PCR 扩增与pET-32a(+)-p7TP2 载体的构建 | 第39页 |
| ·pET-32a(+)-p7TP2 质粒转化大肠杆菌Rosetta-gamiB 菌的鉴定分析 | 第39-40页 |
| ·p7TP2 蛋白的原核表达、Western 免疫印迹分析及纯化 | 第40-41页 |
| ·多克隆抗体的制备和鉴定 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第六章 酵母双杂交技术筛选与 p7TP2 蛋白结合的 肝细胞蛋白编码基因 | 第45-51页 |
| ·材料与方法 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-49页 |
| ·pGBKT7-p7TP2 饵载体的鉴定 | 第46-47页 |
| ·p7TP2 蛋白在酵母菌株的表达 | 第47页 |
| ·单倍体酵母的配合及显色反应 | 第47-48页 |
| ·阳性克隆质粒BglⅡ酶切鉴定分析结果 | 第48-49页 |
| ·测序与同源性分析 | 第49页 |
| ·回交试验结果 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第七章 HCV p7 下调基因 p7TP2 的亚细胞定位研究 | 第51-55页 |
| ·材料与方法 | 第51页 |
| ·细胞、质粒及主要试剂 | 第51页 |
| ·方法 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·p7TP2 基因的PCR 扩增与pEGFP-C1-p7TP2 载体的构建 | 第51-52页 |
| ·GFP 荧光显微镜观察p7TP2 基因产物在不同细胞系的定位 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第八章 HCV p7 蛋白下调基因 p7TP2 启动子序列的 克隆及转录活性的鉴定 | 第55-61页 |
| ·材料与方法 | 第55-56页 |
| ·质粒及主要试剂 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·CpG 岛分析 | 第56-57页 |
| ·p7TP2 基因启动子活性区域的在线预测 | 第57页 |
| ·启动子序列的确定及克隆化 | 第57-58页 |
| ·荧光素酶报告基因表达载体及CAT 报告基因载体的构建 | 第58页 |
| ·重组质粒转染细胞及报告基因CAT 的检测 | 第58-59页 |
| ·利用不同的细胞系转染PGLB-p7TP2-p 质粒，双荧光素酶检测启动子活性 | 第59页 |
| ·共转染试验验证HCVp7 蛋白对p7TP2 启动子活性的影响 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
