| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 一 前言 | 第9-18页 |
| 1.高保真DNA聚合酶的错配校正机制及其应用 | 第10-11页 |
| 2.PCR中的DNA聚合反应非成熟性终止 | 第11-12页 |
| 3.利用高保真DNA聚合酶介导SNP敏感性复合分子“开/关” | 第12-13页 |
| 4.SNP敏感性复合分子“开/关”与其他SNP检测方法的比较 | 第13-17页 |
| 5.课题意义 | 第17-18页 |
| 二 材料与方法 | 第18-29页 |
| 1.主要实验仪器: | 第18页 |
| 2.实验材料: | 第18-20页 |
| ·DNA聚合酶: | 第18-19页 |
| ·质粒和其他试剂: | 第19页 |
| ·引物合成: | 第19页 |
| ·试剂配制: | 第19-20页 |
| 3.实验路线与方法 | 第20-29页 |
| ·样品制备 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21-23页 |
| ·PCR鉴定SNP敏感性复合分子“开/关”的有效性 | 第23-27页 |
| ·假阳性样品HindⅢ酶切分析 | 第27-28页 |
| ·退火温度对假阳性的影响 | 第28页 |
| ·硫代修饰个数对PCR效率的影响 | 第28-29页 |
| 三 实验结果与分析 | 第29-52页 |
| 1.SNP检测样品的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.Pfu酶介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第30-37页 |
| ·Pfu酶与3′末端一个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第30-31页 |
| ·Pfu酶与3′末端两个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第31-33页 |
| ·Pfu酶与3′末端三个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第33-34页 |
| ·退火温度对SNP敏感性复合分子“开/关”的准确性的影响 | 第34-35页 |
| ·Pfu酶介导的SNP敏感性复合分子“开/关”的假阳性结果分析 | 第35-37页 |
| 3.Pyrobest酶介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第37-43页 |
| ·Pyrobest酶与3′末端一个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第37-38页 |
| ·Pyrobest酶与3′末端两个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第38-40页 |
| ·Pyrobest酶与3′末端三个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第40-42页 |
| ·Pyrobest酶介导的SNP敏感性复合分子“开/关”的假阳性结果分析 | 第42-43页 |
| 4.Deep Vent酶介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第43-49页 |
| ·Deep Vent酶与3′末端一个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第43-44页 |
| ·Deep Vent酶与3′末端两个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第44-45页 |
| ·Deep Vent酶与3′末端三个硫代磷酸修饰的碱基特异性引物介导的SNP敏感性复合分子“开/关” | 第45-47页 |
| ·Deep Vent酶介导的SNP敏感性复合分子“开/关”的假阳性结果分析 | 第47-49页 |
| 5.Pfu、Pyrobest和Deep Vent酶介导SNP敏感性复合分子“开/关”的比较 | 第49-52页 |
| 四 讨论 | 第52-61页 |
| 1.SNP敏感性复合分子“开/关”检测SNP的可行性 | 第52页 |
| 2.影响SNP敏感性复合分子“开/关”检测SNP的因素 | 第52-59页 |
| ·模板与“开/关”效应的关系 | 第52-53页 |
| ·PCR退火温度与“开/关”效应的关系 | 第53-54页 |
| ·硫代磷酸修饰与“开/关”效应的关系 | 第54-58页 |
| ·高保真酶活性与“开/关”效应的关系 | 第58-59页 |
| ·Mg~(2+)和dNTP对“开/关”效应的影响 | 第59页 |
| 3.SNP敏感性复合分子“开/关”检测SNP的前景 | 第59-61页 |
| 五 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 附录1 质粒pDC316序列 | 第67-70页 |
| 附录2 缩略语及专有名词注释 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
