| 摘要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 第一章 日本血吸虫成虫性别消减文库的构建及分析 | 第12-31页 |
| 1 引言 | 第12页 |
| 2 材料和方法 | 第12-20页 |
| ·实验动物 | 第12页 |
| ·载体 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12-13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·日本血吸虫雌雄虫的收集 | 第13页 |
| ·日本血吸虫雌雄虫总 RNA 的提取 | 第13页 |
| ·日本血吸虫雌雄虫mRNA 的分离 | 第13页 |
| ·消减杂交分组 | 第13页 |
| ·雌雄虫消减cDNA 质粒文库的构建 | 第13-20页 |
| ·雌雄虫及对照样品（人骨骼肌mRNA）cDNA 第一链的合成 | 第13-14页 |
| ·雌雄虫及对照样品（人骨骼肌mRNA）cDNA 第二链的合成 | 第14-15页 |
| ·雌雄虫及对照样品（人骨骼肌mRNA）双链cDNA 的 Rsa I 酶切 | 第15页 |
| ·作为tester 的雌虫、雄虫及对照骨骼肌cDNA 的接头连接 | 第15-16页 |
| ·接头连接效率分析 | 第16页 |
| ·第一轮消减杂交 | 第16-17页 |
| ·第二轮消减杂交 | 第17-18页 |
| ·消减杂交所获cDNA 的第一轮 PCR 扩增 | 第18页 |
| ·消减杂交cDNA 的第二轮巢式 PCR 扩增 | 第18-19页 |
| ·消减效率的分析 | 第19页 |
| ·消减杂交cDNA 的回收纯化 | 第19页 |
| ·消减杂交cDNA 与载体的连接 | 第19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19-20页 |
| ·消减 cDNA 质粒文库的重组比率及插入片段长度分析 | 第20页 |
| ·消减cDNA 文库的冗余性 | 第20页 |
| ·消减文库部分 EST 序列的生物信息学分析 | 第20页 |
| 3. 结果与分析 | 第20-28页 |
| ·雌虫和雄虫总 RNA 提取 | 第20-21页 |
| ·雌虫和雄虫mRNA 的纯化 | 第21-22页 |
| ·雌虫、雄虫cDNA 及 Rsa I 酶切结果 | 第22页 |
| ·接头连接效率 | 第22-24页 |
| ·性别差异表达基因文库消减效率的分析 | 第24-25页 |
| ·消减cDNA 质粒文库的重组比率及插入片段长度分析 | 第25-26页 |
| ·消减文库的冗余性评价 | 第26-27页 |
| ·消减文库部分 EST 序列的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 5 本章小结 | 第29-31页 |
| 第二章 cDNA微阵列技术分析日本血吸虫成虫性别差异基因表达谱 | 第31-70页 |
| 1 引言 | 第31页 |
| 2 材料和方法 | 第31-39页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第31-33页 |
| ·日本血吸虫雌雄虫的分离收集 | 第33页 |
| ·用于芯片制备的消减杂交克隆的筛选 | 第33页 |
| ·cDNA 微阵列的制作 | 第33页 |
| ·芯片杂交实验 | 第33-35页 |
| ·芯片预杂交 | 第33页 |
| ·荧光标记探针(以下在冰浴中进行) | 第33-35页 |
| ·芯片杂交 | 第35页 |
| ·洗片 | 第35页 |
| ·芯片扫描及数据处理 | 第35-36页 |
| ·差异表达基因杂交数据的在线分析 | 第36页 |
| ·差异表达基因的测序和分析 | 第36页 |
| ·性别差异表达基因的实时定量PCR验证 | 第36-39页 |
| ·RNA 抽提 | 第37页 |
| ·去除基因组 DNA | 第37页 |
| ·反转录 | 第37页 |
| ·标准品的制备 | 第37-38页 |
| ·实时定量 PCR | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-65页 |
| ·cDNA 微阵列的构建 | 第39页 |
| ·差异表达基因芯片杂交结果 | 第39-45页 |
| ·基因芯片杂交数据的聚类分析 | 第45-48页 |
| ·差异表达基因的测序及生物信息学分析 | 第48-63页 |
| ·血吸虫性别差异表达基因的实时定量 PCR 验证 | 第63-65页 |
| ·实时定量 PCR 的标准曲线的绘制 | 第63-64页 |
| ·血吸虫性别差异表达基因的实时荧光定量 PCR 验证结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 5 本章小结 | 第68-70页 |
| 第三章 日本血吸虫性别差异表达新基因全长cDNA 的克隆与分析 | 第70-98页 |
| 1 引言 | 第70页 |
| 2. 材料与方法 | 第70-76页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·主要试剂和酶 | 第70-71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·目标基因的ESTs | 第71页 |
| ·RACE 引物 | 第71-72页 |
| ·日本血吸虫雌雄虫的分离收集 | 第72页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第72页 |
| ·3′和5′RACE 扩增基因全长cDNA | 第72-75页 |
| ·3′RACE | 第72-74页 |
| ·5′RACE | 第74-75页 |
| ·RACE 产物的测序及全长序列的拼接 | 第75页 |
| ·新基因全长cDNA 的 RT-PCR 扩增、克隆及测序 | 第75页 |
| ·新基因全长cDNA 编码蛋白的生物信息学分析 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-94页 |
| ·4 个日本血吸虫性别差异表达新基因全长cDNA 的获得 | 第76-77页 |
| ·差异表达新基因全长cDNA 序列的生物信息学分析 | 第77-94页 |
| ·雌虫高表达的新基因 f2 的生物信息学分析 | 第77-81页 |
| ·雄虫高表达的新基因cm3 cDNA 的生物信息学分析 | 第81-85页 |
| ·雄虫高表达的新基因cm4 cDNA的生物信息学分析 | 第85-91页 |
| ·雄虫高表达的新基因m1 cDNA的生物信息学分析 | 第91-94页 |
| 4 讨论 | 第94-97页 |
| 5 本章小结 | 第97-98页 |
| 结论 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 英文摘要 | 第101-104页 |
| 参考文献 | 第104-121页 |
| 附录 | 第121-143页 |
| 附录A 文献综述 | 第121-141页 |
| 附录B 质粒pGEM-T Easy 基因图谱 | 第141-142页 |
| 附录C 在学期间发表论文及参编著作 | 第142-143页 |
