| 第一章 综述 | 第1-25页 |
| ·前言 | 第6-7页 |
| ·生物固氮研究进展 | 第7-10页 |
| ·生物固氮研究的简况 | 第8-9页 |
| ·我国生物固氮研究状况 | 第9-10页 |
| ·根瘤菌的分类 | 第10-12页 |
| ·豆科植物中固氮共生体系研究 | 第12-17页 |
| ·固氮共生体系中的结瘤基因 | 第13-14页 |
| ·固氮共生体系中的固氮基因 | 第14-16页 |
| ·豆科植物固氮研究的发展趋势 | 第16-17页 |
| ·根瘤菌共生固氮的分子遗传学研究方法 | 第17-23页 |
| ·分离克隆与固氮有关基因的方法 | 第17-18页 |
| ·鉴定与固氮相关基因克隆的主要实验技术 | 第18-23页 |
| ·nifR3-ntrBC操纵子的研究简况 | 第23-24页 |
| ·ntrBC基因在其他固氮菌中的研究情况 | 第23页 |
| ·nifR3基因在其他固氮菌中的研究情况 | 第23-24页 |
| ·本工作目的 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-43页 |
| ·菌株及质粒 | 第25页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·培养基及生长条件 | 第25-27页 |
| ·培养基 | 第25-27页 |
| ·生长条件 | 第27页 |
| ·菌种保存 | 第27页 |
| ·抗菌素 | 第27-28页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第29-32页 |
| ·碱变性法提取质粒DNA | 第29-30页 |
| ·大量制备质粒DNA | 第30-31页 |
| ·试剂盒大量提质粒 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的纯化、定量与沉淀 | 第32-33页 |
| ·酚／氯仿抽提 | 第32页 |
| ·质粒DNA的沉淀与贮存 | 第32-33页 |
| ·分光光度法测定DNA浓度 | 第33页 |
| ·电泳 | 第33-34页 |
| ·DNA酶切 | 第34页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第34页 |
| ·酶切DNA片段的CIP处理 | 第34页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第34-37页 |
| ·透析袋电泳法分离回收DNA片段 | 第35-36页 |
| ·试剂盒法回收DNA片段 | 第36-37页 |
| ·DNA的连接 | 第37-38页 |
| ·载体质粒DNA的去磷酸化 | 第37页 |
| ·DNA连接 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第38-39页 |
| ·快速制备E.coli的感受态细胞——CaCl_2法 | 第38页 |
| ·转化反应 | 第38页 |
| ·质粒DNA的电脉冲导入 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第39页 |
| ·三亲本接合和两亲本接合 | 第39-41页 |
| ·三亲本接合 | 第39-40页 |
| ·两亲本接合 | 第40-41页 |
| ·β-葡糖苷酸酶活性检测 | 第41页 |
| ·根瘤菌生长曲线的测定 | 第41页 |
| ·大豆温室水培试验方法 | 第41-43页 |
| ·供试菌株 | 第41页 |
| ·植物材料 | 第41-42页 |
| ·大豆水培试验 | 第42页 |
| ·实验处理 | 第42页 |
| ·结瘤时间观察 | 第42页 |
| ·占瘤率检测 | 第42页 |
| ·共生固氮效应的测定 | 第42-43页 |
| 第三章 nifR3-ntrBC基因的克隆及测序分析 | 第43-52页 |
| ·重组子pGXHN305的获得 | 第43-44页 |
| ·重组子pGXHN305的进一步测序分析 | 第44-52页 |
| 第四章 HN01突变体及其功能互补菌株的构建 | 第52-57页 |
| ·同源单交换重组质粒的构建 | 第52-54页 |
| ·pnifR3、pntrb、pntrc的克隆 | 第52-53页 |
| ·载体的酶切、连接、转化 | 第53-54页 |
| ·nifR3、ntrB、ntrC基因突变菌株的获得 | 第54-55页 |
| ·互补质粒pGXHN306的构建 | 第55-56页 |
| ·GXHNR、GXHNB、GXHNC功能互补菌株的获得 | 第56-57页 |
| 第五章 突变体生长情况和植株试验 | 第57-62页 |
| ·突变体生长情况 | 第57-59页 |
| ·植株试验 | 第59-62页 |
| ·植株全部结瘤时间的检测 | 第59-61页 |
| ·共生固氮效应的测定 | 第61-62页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
