小鼠骨骼肌细胞SelW基因的RNA干扰研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-16页 |
| 1 绪论 | 第16-26页 |
| ·课题背景与意义 | 第16-19页 |
| ·危害严重影响广泛 | 第16-17页 |
| ·病理机制仍无确论 | 第17-18页 |
| ·研究热点引人关注 | 第18页 |
| ·面临问题需要解决 | 第18-19页 |
| ·国内外研究概况 | 第19-25页 |
| ·SelW的分离鉴定 | 第19-20页 |
| ·SelW的组织分布 | 第20-21页 |
| ·SelW的基因结构 | 第21-22页 |
| ·食物硒的调控作用 | 第22-23页 |
| ·SelW蛋白质组学 | 第23-24页 |
| ·SelW功能的研究 | 第24-25页 |
| ·本课题来源与主要研究内容 | 第25-26页 |
| ·本课题来源 | 第25页 |
| ·主要研究内容 | 第25-26页 |
| 2 小鼠骨骼肌细胞的培养 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·仪器设备及辅助材料 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·试剂的配制 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·小鼠骨骼肌细胞的原代培养 | 第29-31页 |
| ·骨骼肌细胞的选择性纯化 | 第31-32页 |
| ·骨骼肌细胞的克隆化培养 | 第32页 |
| ·控制融合 | 第32-33页 |
| ·小鼠骨骼肌细胞系的培养 | 第33页 |
| ·细胞的冻存和复苏 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-36页 |
| ·培养细胞的观察 | 第34-35页 |
| ·融合控制的结果 | 第35-36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| ·消化试剂的选择使用 | 第36页 |
| ·原代骨骼肌细胞的纯化 | 第36页 |
| ·提高细胞接种率的探讨 | 第36页 |
| ·肌肉细胞培养的具体困难 | 第36-38页 |
| 3 RNA干扰研究 | 第38-48页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·仪器设备 | 第38-39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·试剂的配制 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-45页 |
| ·小RNA的设计与合成 | 第39-41页 |
| ·细胞的准备 | 第41页 |
| ·转染试剂的准备 | 第41-42页 |
| ·转染步骤 | 第42-44页 |
| ·转染效率检测 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-46页 |
| ·过量siRNA导致细胞毒性 | 第45页 |
| ·转染效率符合实验需要 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| ·细胞死亡原因探析 | 第46页 |
| ·实验材料的控制 | 第46-47页 |
| ·强化操作规范 | 第47页 |
| ·优化转染条件 | 第47-48页 |
| 4 流式细胞术对凋亡的检测 | 第48-62页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·仪器设备 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·试剂的配制 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·凋亡的形态学观察 | 第49-51页 |
| ·流式细胞术对凋亡的检测 | 第51-55页 |
| ·结果 | 第55-60页 |
| ·两对合成siRNA作用效能比较 | 第55-56页 |
| ·剂量反应实验 | 第56-59页 |
| ·干扰效率测定及实验干预对细胞状态影响的评价 | 第59-60页 |
| ·机械损伤对检测影响的评估 | 第60页 |
| ·本章小节 | 第60-62页 |
| ·检测的质量控制 | 第60页 |
| ·不同方法检测凋亡结果的相关性 | 第60-62页 |
| 5 目的基因的定量检测 | 第62-83页 |
| ·实验材料 | 第63-65页 |
| ·仪器设备 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-64页 |
| ·试剂的配制 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-79页 |
| ·引物的设计 | 第65-67页 |
| ·标准品的制备和鉴定 | 第67-74页 |
| ·SelW的定量检测 | 第74-79页 |
| ·结果 | 第79-81页 |
| ·剂量反应实验结果 | 第79-80页 |
| ·RNA干扰效率检测实验 | 第80-81页 |
| ·本章小节 | 第81-83页 |
| ·提高实验质量的若干措施 | 第81-82页 |
| ·定量扩增中的具体问题 | 第82-83页 |
| 6 SelW蛋白含量的定量检测 | 第83-97页 |
| ·实验材料 | 第83-86页 |
| ·仪器设备 | 第83-84页 |
| ·试剂 | 第84页 |
| ·溶液的配制 | 第84-86页 |
| ·实验方法 | 第86-94页 |
| ·细胞总蛋白质的制备与浓度测定 | 第86-87页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第87页 |
| ·转移 | 第87-88页 |
| ·兔抗Se1w多克隆抗体的制备 | 第88-92页 |
| ·与抗体的结合 | 第92-93页 |
| ·显影 | 第93-94页 |
| ·结果 | 第94-95页 |
| ·剂量反应实验结果 | 第94-95页 |
| ·干扰效率实验结果 | 第95页 |
| ·本章小节 | 第95-97页 |
| ·非特异性问题与定量准确性问题 | 第95页 |
| ·抗体的选择使用 | 第95-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 附录 | 第108-110页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 独创性声明 | 第112页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第112页 |
