牛分枝杆菌MPB64基因真核表达载体的构建及其免疫研究
| 1 前言 | 第1-17页 |
| ·牛结核病的危害 | 第10页 |
| ·牛结核病DNA疫苗的研究 | 第10-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-28页 |
| ·材料 | 第17-21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·重组克隆质粒与表达载体的制备 | 第21页 |
| ·重组克隆质粒与表达载体的酶切 | 第21-22页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第22页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23页 |
| ·质粒的小量提取 | 第23页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| ·质粒的定量与纯度鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒转染BHK-21细胞 | 第25页 |
| ·MPB64基因在BHK-21中的表达鉴定 | 第25-26页 |
| ·间接荧光抗体检测 | 第25页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·实验动物免疫 | 第26页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的检测 | 第26-27页 |
| ·免疫豚鼠变态反应检测 | 第27页 |
| ·细胞免疫检测 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-37页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第28页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第28-31页 |
| ·质粒的含量和纯度 | 第31页 |
| ·荧光抗体检测 | 第31页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第31-33页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的水平 | 第33页 |
| ·淋巴细胞转化试验 | 第33-35页 |
| ·免疫小鼠CD4~+、CD8~+T细胞数量 | 第35页 |
| ·豚鼠变态反应检测 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-42页 |
| ·关于表达载体 | 第37页 |
| ·关于细胞转染方法 | 第37页 |
| ·关于目的基因的表达检测 | 第37-38页 |
| ·关于表达质粒的纯度 | 第38页 |
| ·关于免疫接种的途径、方法及剂量 | 第38-39页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的水平 | 第39页 |
| ·免疫小鼠的细胞免疫应答 | 第39-40页 |
| ·免疫豚鼠的变态反应 | 第40-42页 |
| 5 小结 | 第42-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 缩略语表 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
