| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-31页 |
| 1 棉纤维细胞发育的过程 | 第14-17页 |
| ·起始期(纤维原始细胞分化和突起) | 第15页 |
| ·伸长期(纤维细胞伸长和初生壁合成) | 第15-16页 |
| ·增厚期(纤维细胞的次生壁合成和增厚) | 第16页 |
| ·成熟期(脱水成熟) | 第16-17页 |
| 2 棉纤维细胞发育相关基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 3 基因克隆技术的研究和进展 | 第18-24页 |
| ·序列克隆 | 第18-19页 |
| ·根据已知基因的序列 | 第18页 |
| ·根据DNA测序结果 | 第18-19页 |
| ·差异表达分析 | 第19-21页 |
| ·差示筛选 | 第19页 |
| ·mRNA差异显示 | 第19-20页 |
| ·抑制消减杂交 | 第20-21页 |
| ·染色体步移技术 | 第21-22页 |
| ·基因组文库 | 第21页 |
| ·接头连接PCR(ligation—mediated PCR) | 第21页 |
| ·反向PCR(Reverse—PCR) | 第21-22页 |
| ·随机引物PCR | 第22页 |
| ·图位克隆 | 第22页 |
| ·转座子或T-DNA标签法 | 第22-23页 |
| ·功能克隆 | 第23-24页 |
| ·根据基因表达的蛋白质 | 第23页 |
| ·根据基因的表型突变互补功能 | 第23页 |
| ·酵母双杂交 | 第23-24页 |
| ·cDNA微阵列(cDNA Array)分析 | 第24页 |
| ·问题与展望 | 第24页 |
| 4 粟酒裂殖酵母概况 | 第24-25页 |
| 5 RNA干扰技术简介 | 第25-27页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第25-26页 |
| ·RNA干扰的作用机制 | 第26页 |
| ·RNA干扰的优点和不足 | 第26-27页 |
| 6 本研究中克隆的五个基因的分子研究进展 | 第27-31页 |
| ·棉纤维表达蛋白(cotton fiber expressed protein,CFE)研究进展 | 第27-28页 |
| ·2,5-二羟苯乙酸1,2-加双氧酶(homogentisate 1,2-dioxygenase,HGD)研究进展 | 第28页 |
| ·过氧化物酶(peroxidase,POD)研究进展 | 第28-29页 |
| ·果胶裂解酶(pectate lyase,PL)研究进展 | 第29-31页 |
| 第二部分 试验材料和方法 | 第31-51页 |
| 1 试验材料 | 第31-35页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·酶、试剂及培养基 | 第31-33页 |
| ·引物 | 第33-35页 |
| 2 方法 | 第35-51页 |
| ·感受态细胞的制备及大肠杆菌的转化 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第36页 |
| ·unigene的获得及序列分析 | 第36-37页 |
| ·棉花总RNA的提取及DNaseI消化 | 第37-39页 |
| ·改进的热硼酸法 | 第37-38页 |
| ·CTAB-酸酚法 | 第38-39页 |
| ·DNaseI消化 | 第39页 |
| ·RACE方法 | 第39-41页 |
| ·RACE的步骤 | 第39-40页 |
| ·扩增产物的电泳,回收,克隆及测序 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR分析 | 第41-42页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| ·RT-PCR | 第41-42页 |
| ·棉花基因组DNA的提取方法 | 第42-43页 |
| ·southern杂交 | 第43-45页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第43-44页 |
| ·杂交尼龙膜的制备 | 第44页 |
| ·DIG标记探针 | 第44页 |
| ·杂交及洗膜 | 第44-45页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第45-48页 |
| ·GhCFE、GhPL的35S启动子正义载体及E6启动子正义和反义载体的构建 | 第45-46页 |
| ·GhPOD2的35S启动子正义和反义载体的构建 | 第46-47页 |
| ·GhPL的RNAi载体构建 | 第47-48页 |
| ·酵母转化 | 第48-49页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第48页 |
| ·酵母感受态制备 | 第48-49页 |
| ·电击转化 | 第49页 |
| ·酵母染色及荧光检测 | 第49页 |
| ·定位分析 | 第49-51页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第51-92页 |
| 1 GhCFE基因的克隆与研究 | 第51-60页 |
| ·序列分析 | 第51-55页 |
| ·表达分析 | 第55-56页 |
| ·southern杂交结果 | 第56-57页 |
| ·植物表达载体的验证 | 第57页 |
| ·酵母转化结果 | 第57-59页 |
| ·酵母载体验证 | 第57-58页 |
| ·转化结果 | 第58-59页 |
| ·染色体定位 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60页 |
| 2 GhHGD基因的克隆和研究 | 第60-68页 |
| ·序列分析 | 第60-65页 |
| ·表达分析 | 第65页 |
| ·southern杂交结果 | 第65-66页 |
| ·酵母转化结果 | 第66-67页 |
| ·酵母载体验证 | 第66页 |
| ·转化结果 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 3 两个GhPOD基因全长的获得和研究 | 第68-79页 |
| ·序列分析 | 第68-75页 |
| ·RACE方法得到GhPOD1全长及序列分析 | 第68-70页 |
| ·cDNA文库单克隆测序获得GhPOD2基因及其序列分析 | 第70-73页 |
| ·GhPOD1、GhPOD2与棉花中已报道的11个过氧化物酶的多重比较 | 第73-75页 |
| ·表达分析 | 第75-76页 |
| ·southern杂交结果 | 第76-77页 |
| ·GhPOD1的southern杂交结果 | 第76页 |
| ·GhPOD2的southern杂交结果 | 第76-77页 |
| ·GhPOD2植物表达载体的验证 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| 4 GhPL基因的克隆和研究 | 第79-90页 |
| ·序列分析 | 第79-84页 |
| ·表达分析 | 第84页 |
| ·southern杂交结果 | 第84-85页 |
| ·植物表达载体的验证 | 第85-86页 |
| ·35S启动子正义和E6启动子正义反义载体的验证 | 第85页 |
| ·RNAi载体的验证 | 第85-86页 |
| ·酵母转化结果 | 第86-88页 |
| ·酵母载体验证 | 第86-87页 |
| ·转化结果 | 第87-88页 |
| ·染色体定位 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| 5 对GhCFE和GhPL染色体定位的分析 | 第90-91页 |
| 6 克隆到的五个基因结构特点分析 | 第91-92页 |
| 全文结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 附录 | 第104-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第109页 |
