致谢 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-30页 |
1 多杀性巴氏杆菌及其生物特性研究 | 第13-21页 |
·多杀性巴氏杆菌血清型及致病性 | 第13-15页 |
·多杀性巴氏杆菌交叉保护因子 | 第15-18页 |
·多杀性巴氏杆菌主要外膜蛋白 | 第18-21页 |
2 基于多杀性巴氏杆菌基因组的研究方法 | 第21-25页 |
·基因芯片 | 第21页 |
·限制性内切酶分析 | 第21-22页 |
·核糖体分型 | 第22-23页 |
·脉冲场凝胶电泳 | 第23-24页 |
·DNA指纹技术 | 第24页 |
·其他基因组学研究方法 | 第24-25页 |
3 膜蛋白的跨膜分泌与选择克隆 | 第25-28页 |
·膜蛋白的跨膜与分泌 | 第25页 |
·用于跨膜分泌与膜蛋白拓扑结构研究的方法 | 第25-27页 |
·报告基因的种类和特性 | 第27-28页 |
·有关报告基因融合方面的应用研究 | 第28页 |
4 本研究的工作基础、目的、意义和主要内容 | 第28-30页 |
·本研究的工作基础 | 第28-29页 |
·本研究的目的、意义和主要内容 | 第29-30页 |
第二章 跨膜输出蛋白基因选择克隆载体的构建 | 第30-43页 |
1 材料 | 第30-31页 |
2 方法 | 第31-36页 |
3 结果 | 第36-41页 |
·pMB-Lac载体的构建和分析 | 第36-38页 |
·Ara启动子的扩增和BamH I位点突变 | 第38页 |
·pMB-Ara载体的构建 | 第38-39页 |
·pMB-Ara载体序列和结构分析 | 第39-41页 |
4 讨论 | 第41-43页 |
第三章 载体pMB-Lac/pMB-Ara调控性验证 | 第43-57页 |
1 材料 | 第44页 |
2 方法 | 第44-48页 |
3 结果 | 第48-54页 |
·△P Tet/△P T7-Tet基因的扩增 | 第48-49页 |
·pMB-Lac△P Tet和pMB-Lac△P T7-Tet重组质粒的构建 | 第49-51页 |
·pMBL△PTet和pMB-Ara△PTet重组质粒的构建 | 第51页 |
·pMB-Lac载体调控性验证 | 第51-52页 |
·pMB-Ara载体验证 | 第52-54页 |
·重组质粒稳定性分析 | 第54页 |
4 讨论 | 第54-57页 |
第四章 多杀性巴氏杆菌跨膜蛋白基因的克隆和分析 | 第57-74页 |
1 材料 | 第57-58页 |
2 方法 | 第58-65页 |
3 结果 | 第65-72页 |
·C48-19基因组部分酶切片段的回收 | 第65页 |
·转化重组子的筛选和PCR扩增插入基因片段 | 第65-66页 |
·杂交分析差异表达的膜蛋白基因片段 | 第66-67页 |
·PCR和酶切鉴定筛选获得的克隆子 | 第67-68页 |
·19~#和88~#克隆诱导生长特性验证 | 第68-69页 |
·膜蛋白基因片段的测序和分析 | 第69-71页 |
·编码肽链的信号肽预测分析 | 第71-72页 |
4 讨论 | 第72-74页 |
本研究的主要结论和创新点 | 第74-75页 |
参考文献 | 第75-83页 |