| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-29页 |
| ·RNA沉默的机制 | 第9-21页 |
| ·小RNA的种类 | 第9-10页 |
| ·Dicer蛋白与siRNA和microRNA的产生 | 第10-12页 |
| ·AGO蛋白和沉默效应子复合体的形成 | 第12-16页 |
| ·RNA干扰介导的转录基因沉默 | 第16-18页 |
| ·沉默信号的扩增与传递 | 第18页 |
| ·RNA干扰的遗传调控 | 第18-19页 |
| ·目前已发现的参与siRNA和miRNA途径的细胞因子 | 第19-21页 |
| ·病毒编码的基因沉默抑制子的研究 | 第21-27页 |
| ·病毒编码的RNAi抑制子的发现及其多样性 | 第22页 |
| ·病毒RNAi抑制子作用的分子机制 | 第22-23页 |
| ·马铃薯Y病毒基因沉默抑制子HC-pro作用的分子机制研究 | 第23-27页 |
| ·其它的一些基因沉默抑制子的抑制机制 | 第27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 烟草中与马铃薯Y病毒Hc-PRO蛋白互作的蛋白因子筛选 | 第29-49页 |
| ·材料与方法 | 第29页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·所用引物 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·酵母操作所需培养基和试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第30-32页 |
| ·烟草cDNA表达文库的构建 | 第32-35页 |
| ·酵母杂交和互作子的筛选 | 第35-37页 |
| ·cDNA文库质粒与诱饵质粒在酵母中互作再验证 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-49页 |
| ·pGBKT7-Hcpro诱饵载体的构建验证 | 第38页 |
| ·烟草总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·双链cDNA文库的扩增 | 第39页 |
| ·杂交结果 | 第39-43页 |
| ·cDNA序列在NCBI上的同源性比较结果 | 第43-49页 |
| 第三章 SZ1和SZ2CDNA全长的克隆及序列分析 | 第49-55页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·SZ15’端的RACE | 第51-52页 |
| ·SZ1的拼接序列 | 第52页 |
| ·SZ1全长的克隆 | 第52-53页 |
| ·SZ2的cDNA全长克隆 | 第53-55页 |
| 第四章 核酸结合蛋白SZ1和20s PROTEASOUE BETA亚基SZ2与HC-PRO的免疫共沉淀研究 | 第55-63页 |
| ·材料与方法 | 第55-60页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·基因互作载体的构建 | 第55-59页 |
| ·SZ1和SZ2分别与HC-pro蛋白的免疫共沉淀 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·SZ1和SZ2分别与HC-pro所构成的互作载体的酶切验证 | 第60-61页 |
| ·SZ1和SZ2的免疫共沉淀 | 第61-63页 |
| 第五章 SZ1和SZ2的原核表达 | 第63-68页 |
| ·材料和方法 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第63页 |
| ·融合蛋白的原核诱导表达 | 第63页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| ·结果和分析 | 第64-68页 |
| ·两个原核表达载体的酶切验证 | 第64-65页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第65-66页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第66-68页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第68-74页 |
| ·讨论 | 第68-73页 |
| ·RNA干扰抑制子HC-pro抑制RNA干扰的可能作用位点 | 第68-69页 |
| ·SZ1的蛋白结构与参与RNA干扰的可能途径探讨 | 第69-70页 |
| ·HC-pro与20S proteasome的互作和影响RNA干扰的可能途径探讨 | 第70-72页 |
| ·酵母双杂交假阳性的控制 | 第72-73页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 缩略词 | 第84-85页 |
| 作者简介 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
