第一章 引言 | 第1-45页 |
1 植物在非生物胁迫下诱导表达的基因 | 第15-24页 |
·在逆境胁迫中直接发挥功能的蛋白 | 第18-21页 |
·感应和传导胁迫信号的蛋白激酶 | 第21-23页 |
·调控基因表达的转录因子 | 第23-24页 |
·下调控基因 | 第24页 |
2 植物对逆境胁迫应答的信号传导途径 | 第24-29页 |
·不依赖于Ca~(2+)的MAPK信号路径 | 第25页 |
·依赖于Ca~(2+)的CDPK信号路径 | 第25-28页 |
·依赖于Ca~(2+)的SOS信号路径 | 第28-29页 |
3 植物在逆境胁迫下的基因表达调控 | 第29-37页 |
·转录水平下植物逆境胁迫应答基因的表达调控 | 第29-36页 |
·转录后水平的调控 | 第36页 |
·植物胁迫响应基因表达网络的复杂性:既具有特异性,又相互协调 | 第36-37页 |
4 抗逆相关转录因子的研究现状 | 第37-40页 |
·AP2/EREBP转录因子 | 第37-39页 |
·bZIP类转录因子 | 第39页 |
·MYB/MYC转录因子 | 第39-40页 |
5 植物抗逆基因工程研究进展 | 第40-43页 |
·渗透调节物质合成的关键酶 | 第40-41页 |
·抗氧化系统酶类基因 | 第41页 |
·LEA类蛋白 | 第41页 |
·转录因子及信号传导有关的蛋白激酶 | 第41-43页 |
6 立题意义、依据及技术路线 | 第43-45页 |
·立题意义、依据 | 第43-44页 |
·技术路线 | 第44-45页 |
第二章 小麦干旱诱导cDNA噬菌体文库的构建与筛选 | 第45-70页 |
1 材料与方法 | 第45-54页 |
·材料 | 第45-46页 |
·方法 | 第46-54页 |
·小麦材料的处理 | 第46页 |
·mRNA的分离 | 第46-47页 |
·cDNA文库的构建 | 第47-48页 |
·cDNA文库的筛选 | 第48-54页 |
2 结果与分析 | 第54-67页 |
·探针的制备 | 第54页 |
·cDNA文库的构建 | 第54页 |
·cDNA文库的筛选 | 第54-56页 |
·DREBs的序列分析 | 第56-64页 |
·DREB2/DREB8的序列分析 | 第56-57页 |
·DREB3/4/5的序列分析 | 第57-60页 |
·DREB6/7的序列分析 | 第60页 |
·DREB9/10的序列分析 | 第60-63页 |
·DREB11的序列分析 | 第63-64页 |
·ERFs(ethylene-responsive factors)的序列分析 | 第64-67页 |
·ERF1的序列分析 | 第64-66页 |
·ERF2的序列分析 | 第66-67页 |
3 讨论 | 第67-70页 |
第三章 目的基因全长cDNA序列的获得与基因结构的分析 | 第70-87页 |
1 材料与方法 | 第70-76页 |
·材料 | 第70-71页 |
·方法 | 第71-76页 |
·小麦材料的处理 | 第71页 |
·总RNA的提取 | 第71页 |
·总RNA的纯化 | 第71-72页 |
·采用5’-RACE法延伸基因的5’端 | 第72-74页 |
·RT-PCR扩增cDNA全长 | 第74-75页 |
·PCR产物的纯化 | 第75页 |
·DH5α、JM109感受态的制备 | 第75页 |
·PCR产物的连接与转化 | 第75-76页 |
2 结果与分析 | 第76-85页 |
·DREB4基因全长序列的获得及基因结构分析 | 第76-80页 |
·DREB8基因全长序列的获得 | 第80-81页 |
·ERF1基因全长序列的获得及基因结构分析 | 第81-85页 |
3 讨论 | 第85-87页 |
第四章 DREB/ERFs基因的表达特性分析与染色体定位 | 第87-101页 |
1 材料与方法 | 第87-94页 |
·材料 | 第87-88页 |
·方法 | 第88-94页 |
·小麦材料的处理 | 第88页 |
·Northern blot | 第88-91页 |
·Southern blot | 第91-94页 |
2 结果与分析 | 第94-99页 |
·探针的扩增 | 第94页 |
·基因表达特性分析 | 第94-97页 |
·小麦总RNA的提取 | 第94-95页 |
·DREB4基因的表达特性分析 | 第95页 |
·ERF1基因的表达特性分析 | 第95-96页 |
·ERF2基因的表达特性分析 | 第96-97页 |
·基因的染色体定位 | 第97-99页 |
·利用Southern blot进行基因染色体定位 | 第97-98页 |
·利用PCR技术进行基因染色体定位 | 第98-99页 |
3 讨论 | 第99-101页 |
第五章 DREB/ERFs蛋白的结合特异性与激活功能分析 | 第101-119页 |
1 材料与方法 | 第101-110页 |
·材料 | 第101-102页 |
·方法 | 第102-110页 |
·转录因子的体外结合特异性分析 | 第102-106页 |
·融合表达载体的构建 | 第102-103页 |
·融合蛋白的诱导表达及检测 | 第103-104页 |
·融合蛋白的纯化回收 | 第104-105页 |
·凝胶阻滞分析 | 第105-106页 |
·转录因子的体内结合特异性和激活功能分析 | 第106-110页 |
·YepGAP表达载体的构建 | 第106-107页 |
·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第107-108页 |
·转录因子的体内结合特异性和激活功能分析 | 第108-110页 |
·酵母报道子的构建 | 第108页 |
·体内结合特异性和激活功能分析 | 第108-110页 |
2 结果与分析 | 第110-117页 |
·转录因子的体外结合特异性分析 | 第110-115页 |
·融合表达载体的构建 | 第110-111页 |
·DREB/ERF融合蛋白的诱导表达 | 第111-114页 |
·DREB融合蛋白的诱导表达 | 第111页 |
·GST和ERF融合蛋白的诱导表达 | 第111-114页 |
·DREB/ERF蛋白的凝胶阻滞分析 | 第114-115页 |
·DREB蛋白的凝胶阻滞分析 | 第114-115页 |
·ERF蛋白的凝胶阻滞分析 | 第115页 |
·转录因子的体内结合特异性和激活功能分析 | 第115-117页 |
·YepGAP表达载体的构建 | 第115-116页 |
·DREB4/5的体内结合特异性和激活功能分析 | 第116-117页 |
3 讨论 | 第117-119页 |
第六章 DREB/ERFs基因的功能分析 | 第119-140页 |
1 材料与方法 | 第119-129页 |
·材料 | 第119-120页 |
·方法 | 第120-129页 |
·双子叶植物转基因载体的构建 | 第120-121页 |
·转基因拟南芥植株的获得 | 第121-124页 |
·转基因烟草植株的获得 | 第124-125页 |
·单子叶植物转基因载体的构建 | 第125-127页 |
·转基因小麦植株的获得 | 第127-129页 |
2 结果与分析 | 第129-138页 |
·双子叶植物转基因载体的构建 | 第129-130页 |
·载体的构建 | 第129页 |
·转化农杆菌 | 第129-130页 |
·转基因拟南芥植株的获得及功能鉴定 | 第130-134页 |
·拟南芥转化及筛选 | 第130-131页 |
·转基因拟南芥植株的非生物胁迫分析 | 第131-133页 |
·转基因拟南芥植株的抗病性分析 | 第133-134页 |
·转基因烟草植株的获得及检测 | 第134-136页 |
·转基因烟草植株的获得 | 第134-135页 |
·转基因烟草植株的检测 | 第135-136页 |
·转基因小麦植株的获得及功能鉴定 | 第136-138页 |
·基因枪法转化小麦 | 第136页 |
·T_0代转基因小麦再生植株的PCR检测 | 第136-138页 |
·T_1代转基因植株的抗旱鉴定 | 第138页 |
3 讨论 | 第138-140页 |
第七章 结论 | 第140-142页 |
参考文献 | 第142-161页 |
附录1 | 第161-162页 |
附录2 | 第162-163页 |
致谢 | 第163-165页 |
作者简历 | 第165页 |
博士生期间发表或待发表的论文: | 第165页 |
国际国内学术会议论文: | 第165页 |