摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
缩略语表 | 第9-10页 |
前言 | 第10-26页 |
1. 玉米耐渍性研究进展 | 第10-20页 |
1.1 激素调节的响应 | 第10-11页 |
1.2 根的呼吸能力 | 第11-12页 |
1.3 叶片的气体交换 | 第12-13页 |
1.4 叶肉细胞的光合作用效率 | 第13页 |
1.5 糖份与耐渍性 | 第13-14页 |
1.6 氮代谢与耐渍性 | 第14页 |
1.7 茎和根的代谢不平衡 | 第14-15页 |
1.8 相关的厌氧发酵途径 | 第15-17页 |
1.9 氧缺乏的感应 | 第17页 |
1.10 基因表达调控 | 第17-19页 |
1.11 低氧锻炼 | 第19-20页 |
2. 常见功能基因组研究方法 | 第20-25页 |
2.1 cDNA芯片技术(cDNA microarray) | 第21-22页 |
2.2 基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE) | 第22页 |
2.3 cDNA-AFLP | 第22-23页 |
2.4 差异展示 PCR(Differential Display Reverse Transcription PCR,DDRT-PCR) | 第23-24页 |
2.5 抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH) | 第24-25页 |
2.6 现有功能基因组研究方法的缺点 | 第25页 |
3. 本课题研究的目的和意义 | 第25-26页 |
材料与方法 | 第26-37页 |
1. 材料及处理 | 第26页 |
2. 总 RNA抽提和mRNA分离 | 第26-27页 |
3. SSH文库的构建 | 第27-32页 |
3.1 mRNA反转录 | 第27-28页 |
3.2 用 RsaI酶消化cDNA | 第28页 |
3.3 接头连接 | 第28-29页 |
3.4 第一次杂交 | 第29-30页 |
3.5 第二次杂交 | 第30页 |
3.6 第一次 PCR扩增 | 第30-31页 |
3.7 第二次 PCR扩增 | 第31-32页 |
3.8 PCR产物和 T-载体连接 | 第32页 |
3.9 电转化(以下操作均在无菌环境下进行) | 第32页 |
4. SSH文库的筛选 | 第32-33页 |
5. 利用cDNA芯片筛选耐渍相关克隆 | 第33页 |
6. Northern杂交分析 | 第33-35页 |
6.1 转膜 | 第33-34页 |
6.2 预杂交/杂交 | 第34-35页 |
7. RT-PCR分析 | 第35-37页 |
7.1 反转录(revert transcription,RT)合成第一链cDNA链 | 第35-36页 |
7.2 利用特异引物进行 PCR扩增 | 第36-37页 |
结果与分析 | 第37-52页 |
1. RNA含量和质量的检测 | 第37页 |
2. mRNA的质量检测 | 第37-38页 |
3. SSH文库的构建及质量检测 | 第38-41页 |
3.1 Rsa I消化效率的检测 | 第38页 |
3.2 接头连接效率的检测 | 第38-39页 |
3.3 文库插入片段的检测 | 第39-40页 |
3.4 消减效率的检测 | 第40-41页 |
4. SSH文库的构建的阳性对照 | 第41-42页 |
5. SSH文库的筛选 | 第42页 |
6. cDNA芯片的筛选 | 第42-44页 |
7. SSH文库和cDNA芯片中筛选到的阳性克隆的分析 | 第44-50页 |
7.1 不同耐渍性材料对淹水胁迫早期响应的差异 | 第48-49页 |
7.2 SSH与cDNA芯片技术的比较分析 | 第49-50页 |
8. 几个相关基因的表达谱 | 第50-51页 |
9. Northern及 RT-PCR验证 | 第51-52页 |
讨论 | 第52-59页 |
1. SSH和cDNA芯片比较 | 第52-53页 |
2. 本研究中筛选到的几个相关基因与玉米耐渍性的关系 | 第53-56页 |
2.1 Adh和 Pdc | 第53-54页 |
2.2 细胞pH值和能量代谢相关基因 | 第54-55页 |
2.3 依耐于 Ca~2+的信号传导途径相关基因 | 第55-56页 |
3. 甾醇代谢相关基因 | 第56-57页 |
4. 耐渍基因定位 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-74页 |
致谢 | 第74-75页 |
附录 | 第75-78页 |