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利用抑制消减杂交和cDNA芯片技术筛选玉米耐渍相关的cDNA片段

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-9页
缩略语表第9-10页
前言第10-26页
 1. 玉米耐渍性研究进展第10-20页
  1.1 激素调节的响应第10-11页
  1.2 根的呼吸能力第11-12页
  1.3 叶片的气体交换第12-13页
  1.4 叶肉细胞的光合作用效率第13页
  1.5 糖份与耐渍性第13-14页
  1.6 氮代谢与耐渍性第14页
  1.7 茎和根的代谢不平衡第14-15页
  1.8 相关的厌氧发酵途径第15-17页
  1.9 氧缺乏的感应第17页
  1.10 基因表达调控第17-19页
  1.11 低氧锻炼第19-20页
 2. 常见功能基因组研究方法第20-25页
  2.1 cDNA芯片技术(cDNA microarray)第21-22页
  2.2 基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)第22页
  2.3 cDNA-AFLP第22-23页
  2.4 差异展示 PCR(Differential Display Reverse Transcription PCR,DDRT-PCR)第23-24页
  2.5 抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)第24-25页
  2.6 现有功能基因组研究方法的缺点第25页
 3. 本课题研究的目的和意义第25-26页
材料与方法第26-37页
 1. 材料及处理第26页
 2. 总 RNA抽提和mRNA分离第26-27页
 3. SSH文库的构建第27-32页
  3.1 mRNA反转录第27-28页
  3.2 用 RsaI酶消化cDNA第28页
  3.3 接头连接第28-29页
  3.4 第一次杂交第29-30页
  3.5 第二次杂交第30页
  3.6 第一次 PCR扩增第30-31页
  3.7 第二次 PCR扩增第31-32页
  3.8 PCR产物和 T-载体连接第32页
  3.9 电转化(以下操作均在无菌环境下进行)第32页
 4. SSH文库的筛选第32-33页
 5. 利用cDNA芯片筛选耐渍相关克隆第33页
 6. Northern杂交分析第33-35页
  6.1 转膜第33-34页
  6.2 预杂交/杂交第34-35页
 7. RT-PCR分析第35-37页
  7.1 反转录(revert transcription,RT)合成第一链cDNA链第35-36页
  7.2 利用特异引物进行 PCR扩增第36-37页
结果与分析第37-52页
 1. RNA含量和质量的检测第37页
 2. mRNA的质量检测第37-38页
 3. SSH文库的构建及质量检测第38-41页
  3.1 Rsa I消化效率的检测第38页
  3.2 接头连接效率的检测第38-39页
  3.3 文库插入片段的检测第39-40页
  3.4 消减效率的检测第40-41页
 4. SSH文库的构建的阳性对照第41-42页
 5. SSH文库的筛选第42页
 6. cDNA芯片的筛选第42-44页
 7. SSH文库和cDNA芯片中筛选到的阳性克隆的分析第44-50页
  7.1 不同耐渍性材料对淹水胁迫早期响应的差异第48-49页
  7.2 SSH与cDNA芯片技术的比较分析第49-50页
 8. 几个相关基因的表达谱第50-51页
 9. Northern及 RT-PCR验证第51-52页
讨论第52-59页
 1. SSH和cDNA芯片比较第52-53页
 2. 本研究中筛选到的几个相关基因与玉米耐渍性的关系第53-56页
  2.1 Adh和 Pdc第53-54页
  2.2 细胞pH值和能量代谢相关基因第54-55页
  2.3 依耐于 Ca~2+的信号传导途径相关基因第55-56页
 3. 甾醇代谢相关基因第56-57页
 4. 耐渍基因定位第57-59页
参考文献第59-74页
致谢第74-75页
附录第75-78页

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