| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·单链抗体的研究进展 | 第10-13页 |
| ·单链抗体的构建 | 第11-12页 |
| ·单链抗体的表达 | 第12页 |
| ·单链抗体的应用 | 第12-13页 |
| ·单链抗体的前景展望 | 第13页 |
| ·嵌合抗体的研究进展 | 第13-15页 |
| ·嵌合抗体的研制 | 第14-15页 |
| ·嵌合抗体的真核表达 | 第15页 |
| ·小结 | 第15-17页 |
| 2 抗人L-PGDS抗体可变区基因的克隆及序列分析 | 第17-29页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·材料与方法 | 第17-21页 |
| ·主要实验材料、仪器和试剂 | 第17-18页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第18-19页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第19页 |
| ·逆转录反应 | 第19页 |
| ·PCR扩增抗人L-PGOS单抗可变区基因 | 第19-20页 |
| ·目的基因的分离、纯化及加尾 | 第20页 |
| ·重组载体pGEM-T/VL、pGEM-T/VH的构建及转化 | 第20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20页 |
| ·目的基因的测序及序列分析 | 第20-21页 |
| ·结果 | 第21-27页 |
| ·RT-PCR扩增抗人L-PGDS抗体可变区基因 | 第21页 |
| ·重组载体的构建及鉴定 | 第21-22页 |
| ·抗人L-PGOS抗体可变区基因的测序及序列分析 | 第22-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 3 抗人L-PGDS单链抗体的构建及表达 | 第29-46页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·材料与方法 | 第29-36页 |
| ·主要实验材料、仪器和试剂 | 第29-30页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·抗人L-PGDS ScFv基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/ScFv的构建及转化 | 第31-32页 |
| ·抗人L-PGDS ScFv的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白抗人L-PGDS ScFv的纯化 | 第33-34页 |
| ·双夹心酶联免疫吸附法检测目的蛋白抗原结合活性 | 第34-35页 |
| ·目的抗体蛋白的效价测定 | 第35页 |
| ·免疫荧光竞争抑制法检测目的蛋白抗原结合特异性 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-44页 |
| ·抗人L-PGDS ScFv基因的克隆 | 第36页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)/ScFv的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·ScFv目的基因序列测定 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)/ScFv的诱导表达 | 第39-41页 |
| ·重组蛋白ScFv的纯化 | 第41-42页 |
| ·双夹心ELISA检测L-PGDS ScFv的抗原结合活性 | 第42页 |
| ·目的抗体蛋白的效价测定 | 第42-43页 |
| ·免疫荧光竟争抑制法检测L-PGDS ScFv的抗原结合特异性 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 4 抗人L-PGDS人—鼠嵌合抗体的构建及表达 | 第46-54页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料和方法 | 第46-50页 |
| ·主要实验材料、仪器和试剂 | 第46-47页 |
| ·抗人L-PGDS人—鼠嵌合抗体表达载体的构建及鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组轻链表达载体pAG4622/VL的Sp2/0细胞转染及筛选 | 第48页 |
| ·细胞克隆的ELISA初步检测 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的有限稀释 | 第49页 |
| ·稳定分泌嵌合轻链细胞的扩大培养及ELISA检测 | 第49页 |
| ·稳定分泌嵌合轻链细胞的RT-PCR检测 | 第49-50页 |
| ·重组重链表达载体pAH4604/VH的Sp2/0细胞共转染及筛选 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-52页 |
| ·抗人L-PGDS人—鼠嵌合抗体表达载体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| ·人—鼠嵌合轻链在SP2/0细胞中的稳定表达及ELISA检测 | 第51页 |
| ·人—鼠嵌合轻链的RT-PCR检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 研究生期间的主要学术成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
