| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 综述 | 第8-26页 |
| 一、干扰素概述 | 第8-12页 |
| 1、干扰素的分类及特性 | 第8-9页 |
| 2、干扰素的诱导合成 | 第9页 |
| 3、干扰素的生物进化及其功能 | 第9-10页 |
| 4、干扰素的作用机理 | 第10-11页 |
| 5、干扰素系统在病毒感染中的重要作用 | 第11-12页 |
| 二、猪α干扰素的研究进展 | 第12-15页 |
| 1、猪干扰素简介 | 第12-13页 |
| 2、猪α干扰素理化性质及结构特点 | 第13页 |
| 3、猪干扰素的基因工程 | 第13-14页 |
| 4、猪α干扰素实际应用及前景展望 | 第14-15页 |
| 三、巴斯德毕赤酵母表达系统概述 | 第15-18页 |
| 1、毕赤酵母的生物学和遗传学特点 | 第15-16页 |
| 2、毕赤酵母表达系统的构成 | 第16-18页 |
| ·毕赤酵母宿主菌 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第17-18页 |
| ·信号肽序列 | 第18页 |
| 四、利用毕赤酵母表达外源蛋白质 | 第18-21页 |
| 1、毕赤酵母高效表达外源基因的机理及特点 | 第18-19页 |
| 2、毕赤酵母表达外源蛋白的一般步骤 | 第19-21页 |
| ·克隆 | 第19页 |
| ·表达载体的线性化 | 第19页 |
| ·转化 | 第19-20页 |
| ·筛选 | 第20页 |
| ·鉴定表型 | 第20页 |
| ·诱导表达 | 第20-21页 |
| 五、毕赤酵母在表达外源蛋白生产中的优势及广泛应用 | 第21页 |
| 六、影响外源蛋白在毕赤酵母中高效表达的因素及策略 | 第21-23页 |
| ·影响高效表达的因素 | 第22页 |
| ·实现高效表达的策略 | 第22-23页 |
| 七、毕赤酵母表达系统的应用前景及展望 | 第23页 |
| 八、研究目的、方法及结果 | 第23-26页 |
| 1、研究目的 | 第23-24页 |
| 2、研究方法 | 第24页 |
| 3、研究结果 | 第24-26页 |
| 第二部分 实验内容 | 第26-58页 |
| 第一章 猪α干扰素表达载体的构建及测序 | 第26-36页 |
| 一、实验材料 | 第26-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-31页 |
| 1、试剂的配制 | 第27页 |
| 2、目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3、重组质粒IFNα-T vector的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| 4、表达载体IFNα-pPICZαA的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| 三、实验结果 | 第31-34页 |
| 1、目的基因的扩增及克隆鉴定 | 第32-33页 |
| 2、表达载体IFNα-pPICZα A的鉴定 | 第33-34页 |
| 四、讨论 | 第34-36页 |
| 第二章、达载体IFN-pPICZα A电转化毕赤酵母KM71H及高抗性重组菌株的筛选及阳性克隆的鉴定 | 第36-46页 |
| 一、实验材料 | 第36-37页 |
| 二、实验方法 | 第37-41页 |
| 1、试剂的配制 | 第37-38页 |
| 2、空载体pPICZα A及表达载体IFNα-pPICZα A的线性化 | 第38-39页 |
| 3、酵母感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 4、电转化 | 第39-40页 |
| 5、高抗性重组菌株的筛选 | 第40-41页 |
| 三、实验结果 | 第41-44页 |
| 1、质粒pPICZα A及IFN-pPICZα A的线性化 | 第41-42页 |
| 2、电转化 | 第42页 |
| 3、高抗性重组菌株的筛选及阳性克隆的鉴定 | 第42-44页 |
| 四、讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 重组酵母菌株的诱导表达及免疫学鉴定 | 第46-58页 |
| 一、实验材料 | 第46页 |
| 二、实验方法 | 第46-51页 |
| 1、试剂的配制 | 第46-48页 |
| 2、重组酵母菌株的诱导表达 | 第48-49页 |
| 3、Western blot检测 | 第49-50页 |
| 4、表达蛋白的纯化及BCA法蛋白浓度测定 | 第50页 |
| 5、重组蛋白的活性检测 | 第50-51页 |
| 三、实验结果 | 第51-55页 |
| 1、重组菌株生长曲线 | 第51页 |
| 2、重组菌株的诱导表达 | 第51-52页 |
| 3、Western blot检测 | 第52-53页 |
| 4、表达蛋白的纯化及BCA法蛋白浓度测定 | 第53页 |
| 5、重组蛋白的活性检测 | 第53-55页 |
| 四、讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
