| 第一部分 黑麦草离体再生体系的建立和基因枪法介导的遗传转化研究 | 第1-49页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 黑麦草遗传转化的研究进展 | 第11-12页 |
| 2 草坪草遗传转化的主要方法 | 第12-16页 |
| 2．1 基因枪转化法 | 第12-15页 |
| 2．2 农杆菌介导法 | 第15-16页 |
| 2．3 原生质体转化法 | 第16页 |
| 2．4 硅碳纤维介导法 | 第16页 |
| 3 草坪草遗传转化的报告基因和选择标记基因 | 第16-18页 |
| 3．1 报告基因 | 第16-17页 |
| 3．2 选择标记基因 | 第17-18页 |
| 4 转基因草坪草的分子生物学检测 | 第18页 |
| 5 外源基因在转基因草坪草中的整合和表达 | 第18-20页 |
| 5．1 外源基因在转基因草坪草中的整合 | 第18-19页 |
| 5．2 外源基因在转基因草坪草中的表达 | 第19-20页 |
| 6 草坪草遗传转化中存在的主要问题和展望 | 第20页 |
| 7 本实验的研究目的和意义 | 第20-22页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第22-31页 |
| 1 黑麦草离体再生体系的建立 | 第22-23页 |
| 1．1 植物材料 | 第22页 |
| 1．2 培养基 | 第22页 |
| 1．3 多年生黑麦草成熟胚离体再生体系的建立 | 第22-23页 |
| 1．3．1 成熟种子的消毒 | 第22页 |
| 1．3．2 胚性愈伤组织的诱导与继代 | 第22-23页 |
| 1．3．3 植株的分化与再生 | 第23页 |
| 2 用基因枪法将水稻几丁质酶基因导入黑麦草的研究 | 第23-31页 |
| 2．1 植物材料 | 第23页 |
| 2．2 质粒的构建、提取、检测和酶切分析 | 第23-25页 |
| 2．2．1 质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2．2．2 质粒DNA的提取 | 第24页 |
| 2．2．3 质粒DNA的电泳检测 | 第24页 |
| 2．2．4 紫外分光光度法测定质粒 DNA含量 | 第24页 |
| 2．2．5 质粒DNA的酶切分析 | 第24-25页 |
| 2．3 金粒的制备 | 第25页 |
| 2．4 材料的渗透处理和微弹轰击 | 第25页 |
| 2．5 转化体的筛选及植株的再生 | 第25-26页 |
| 2．6 β-葡糖醛酸糖苷酶(gus)基因瞬间表达分析 | 第26页 |
| 2．7 再生植株的分子鉴定 | 第26-31页 |
| 2．7．1 黑麦草基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2．7．2 再生植株的PCR检测 | 第27-28页 |
| 2．7．3 杂交探针的制备 | 第28-29页 |
| 2．7．4 再生植株Southern杂交检测 | 第29-31页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第31-38页 |
| 1 黑麦草离体再生体系的建立 | 第31页 |
| 2 用基因枪法将水稻几丁质酶导入黑麦草中的研究 | 第31-38页 |
| 2．1 不同微弹用量和轰击次数对GUS表达的影响 | 第31-32页 |
| 2．2 质粒DNA的酶切分析 | 第32-33页 |
| 2．3 转基因黑麦草植株的PCR分析 | 第33-34页 |
| 2．4 基因枪轰击的次数及结果 | 第34页 |
| 2．5 PCR检测中非特异片段的分析 | 第34-36页 |
| 2．6 除草剂涂抹实验 | 第36页 |
| 2．7 转基因植株的Southern杂交分析 | 第36-38页 |
| Ⅳ 分析与讨论 | 第38-42页 |
| 1 黑麦草离体再生体系的建立 | 第38-39页 |
| 2 用基因枪法将水稻几丁质酶基因导入黑麦草中的研究 | 第39-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 第二部分 利用简并引物PCR技术克隆抗盐基因片段 | 第49-92页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第49-59页 |
| 1 简并PCR技术研究进展 | 第49-52页 |
| 1．1 简并PCR技术 | 第49-51页 |
| 1．1．1 简并引物 | 第49-50页 |
| 1．1．2 简并引物的设计 | 第50页 |
| 1．1．3 简并引物的反应条件 | 第50-51页 |
| 1．2 简并PCR技术在基因克隆中的应用 | 第51-52页 |
| 1．2．1 基因的克隆策略 | 第51-52页 |
| 1．2．2 在基因克隆中的应用 | 第52页 |
| 2 Na~+/H~+逆向转运蛋白研究进展 | 第52-59页 |
| 2．1 植物液泡膜Na~+/H逆向转运蛋白的研究进展 | 第52-58页 |
| 2．1．1 Na~+在液泡中的区隔化效应 | 第53页 |
| 2．1．2 植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的分离 | 第53-55页 |
| 2．1．3 植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的功能与作用机制 | 第55-56页 |
| 2．1．4 植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的表达特征 | 第56-57页 |
| 2．1．5 调控植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因表达的信号通路 | 第57页 |
| 2．1．6 液泡膜Na~+/H~+逆赂转运蛋白基因在植物耐盐基因工程中的应用 | 第57-58页 |
| 2．2 本研究的意义 | 第58-59页 |
| Ⅱ 实验部分 | 第59-88页 |
| 1 材料和方法 | 第59-65页 |
| 1．1 植物材料 | 第59页 |
| 1．2 试剂 | 第59页 |
| 1．3 总RNA和 DNA的提取 | 第59-60页 |
| 1．3．1 总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 1．3．2 植物基因组DNA的提取 | 第60页 |
| 1．4 cDNA第一链的合成 | 第60-61页 |
| 1．5 RT-PCR和PCR反应 | 第61-62页 |
| 1．5．1 引物设计 | 第61-62页 |
| 1．5．2 PCR和RT-PCR反应 | 第62页 |
| 1．6 RT-PCR和PCR反应产物的回收 | 第62-63页 |
| 1．7 DNA与载体的连接 | 第63页 |
| 1．8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第63-64页 |
| 1．9 连接产物的大肠杆菌转化 | 第64页 |
| 1．10 重组质粒的提取 | 第64-65页 |
| 1．11 重组质粒的酶切鉴定 | 第65页 |
| 1．12 DNA序列测定 | 第65页 |
| 2 结果与讨论 | 第65-88页 |
| 2．1 总RNA的提取 | 第65-66页 |
| 2．2 利用简并引物进行RT-PCR和PCR反应 | 第66-77页 |
| 2．2．1 几种植物的液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白的氨基酸序列比对 | 第67-71页 |
| 2．2．2 PCR反应条件和体系 | 第71-74页 |
| 2．2．3 简并引物PCR反应 | 第74页 |
| 2．2．4 产物的回收 | 第74-77页 |
| 2．3 测序结果分析 | 第77-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 攻读硕士研究生期间发表的文章 | 第93-94页 |
| 图版说明 | 第94-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
