| 第一章 文献综述 | 第1-24页 |
| 1． 1 凝血酶 | 第8-11页 |
| 1． 2 包涵体及蛋白质复性 | 第11-23页 |
| 1． 2． 1 包涵体的形成 | 第11-12页 |
| 1． 2． 2 包涵体蛋白的分离、纯化及溶解 | 第12-13页 |
| 1． 2． 3 包涵体蛋白的复性 | 第13-23页 |
| 1． 2． 3． 1 影响包涵体体外复性的因素 | 第13-14页 |
| 1． 2． 3． 2 蛋白质体外复性方法 | 第14-23页 |
| 1． 2． 3． 2． 1 稀释及透析复性 | 第14-15页 |
| 1． 2． 3． 2． 2 折叠促进剂协助复性 | 第15-18页 |
| 1． 2． 3． 2． 3 分子伴侣及折叠酶介导的复性 | 第18-19页 |
| 1． 2． 3． 2． 4 层析折叠复性 | 第19-20页 |
| 1． 2． 3． 2． 5 其它复性方法 | 第20-23页 |
| 1． 3 本文的研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 牛凝血酶原-2包涵体的制备 | 第24-36页 |
| 2． 1 引言 | 第24页 |
| 2． 2 实验材料及方法 | 第24-25页 |
| 2． 2． 1 实验材料 | 第24页 |
| 2． 2． 2 实验仪器 | 第24页 |
| 2． 2． 3 实验方法 | 第24-25页 |
| 2． 2． 3． 1 质粒转化 | 第24-25页 |
| 2． 2． 3． 2 包涵体的获得 | 第25页 |
| 2． 2． 3． 3 电泳及凝胶图像分析 | 第25页 |
| 2． 3 结果与讨论 | 第25-34页 |
| 2． 3． 1 含凝血酶原-2质粒的大肠杆菌的生长及目标蛋白表达 | 第25-26页 |
| 2． 3． 2 发酵培养条件的优化 | 第26-32页 |
| 2． 3． 2． 1 初始培养基的确定 | 第26-27页 |
| 2． 3． 2． 2 添加不同碳源的影响 | 第27-28页 |
| 2． 3． 2． 3 不同氮源比例的影响 | 第28-29页 |
| 2． 3． 2． 4 添加Mg~(2+)和M9的影响 | 第29-30页 |
| 2． 3． 2． 5 诱导起始时间的影响 | 第30页 |
| 2． 3． 2． 6 不同诱导剂量的影响 | 第30-31页 |
| 2． 3． 2． 7 接种量、培养温度及转速的影响 | 第31-32页 |
| 2． 3． 3 凝血酶原-2包涵体的洗涤优化 | 第32-34页 |
| 2． 4 小结 | 第34-36页 |
| 第三章 稀释法复性凝血酶原-2 | 第36-45页 |
| 3． 1 引言 | 第36页 |
| 3． 2 实验材料与方法 | 第36-38页 |
| 3． 2． 1 实验材料 | 第36页 |
| 3． 2． 2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3． 2． 3 实验方法 | 第37-38页 |
| 3． 2． 3． 1 凝血酶原-2包涵体的制备、洗涤和溶解 | 第37页 |
| 3． 2． 3． 2 稀释复性 | 第37页 |
| 3． 2． 3． 3 凝血酶原激活剂蛇毒的预处理 | 第37页 |
| 3． 2． 3． 4 凝血酶原-2的激活 | 第37-38页 |
| 3 . 2 . 3 . 5凝血酶活力的测定 | 第38页 |
| 3． 2． 3．6 凝血酶活力的测定 | 第38页 |
| 3． 3 结果与讨论 | 第38-43页 |
| 3． 3． 1 蛋白质初始浓度及变性剂对凝血酶原-2复性的影响 | 第38-39页 |
| 3． 3． 2 氧化还原环境对凝血酶原-2复性的影响 | 第39-40页 |
| 3． 3． 3 添加聚集抑制剂时的一次回归正交试验 | 第40-41页 |
| 3． 3． 4 快速登高试验 | 第41-42页 |
| 3． 3． 5 凝血酶的荧光光谱表征 | 第42-43页 |
| 3． 4 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 PNIPA凝胶协助凝血酶原-2复性 | 第45-51页 |
| 4． 1 引言 | 第45页 |
| 4． 2 实验材料与方法 | 第45-47页 |
| 4． 2． 1 实验材料 | 第45-46页 |
| 4． 2． 2 实验仪器 | 第46-47页 |
| 4． 2． 3 实验方法 | 第47页 |
| 4． 3 结果与讨论 | 第47-50页 |
| 4． 3． 1 PNIPA凝胶的外观及结构表征 | 第47-49页 |
| 4． 3． 2 PNIPA凝胶协助凝血酶原-2复性的研究 | 第49-50页 |
| 4． 4 小结 | 第50-51页 |
| 第五章 DsbA的制备及其协助凝血酶原-2复性的初步研究 | 第51-63页 |
| 5． 1 引言 | 第51-52页 |
| 5． 2 实验材料与方法 | 第52-56页 |
| 5． 2． 1 实验材料 | 第52-54页 |
| 5． 2． 2 实验仪器 | 第54页 |
| 5． 2． 3 实验方法 | 第54-56页 |
| 5． 2． 3． 1 pAVD63质粒的转化 | 第54-55页 |
| 5． 2． 3． 2 DsbA的发酵制备 | 第55-56页 |
| 5． 2． 3． 2． 1 基于统计原理的实验设计方法 | 第55页 |
| 5． 2． 3． 2． 2 筛选实验-Plackett-Burman设计 | 第55页 |
| 5． 2． 3． 2． 3 优化实验-杂合设计(Hybrid design) | 第55-56页 |
| 5． 2． 3． 2． 4 验证试验 | 第56页 |
| 5． 2． 3． 2． 5 DsbA的离子层析纯化 | 第56页 |
| 5． 2． 3． 3 DsbA协助pThr-2复性 | 第56页 |
| 5． 3 实验结果与讨论 | 第56-61页 |
| 5． 3． 1 DsbA的发酵优化 | 第56-60页 |
| 5． 3． 2 DsbA的分离纯化 | 第60-61页 |
| 5． 3． 3 DsbA协助凝血酶原-2复性的初步研究 | 第61页 |
| 5． 4 小结 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
